1、擬南芥PHR1和水稻PHR2作為植物響應(yīng)缺磷脅迫的中心調(diào)控因子，參與大部分下游缺磷響應(yīng)基因的表達(dá)。含SPX結(jié)構(gòu)域的基因參與調(diào)控磷信號(hào)與體內(nèi)磷平衡也有報(bào)道。已有遺傳學(xué)證據(jù)表明水稻PHR2與水稻SPX1和SPX2（以下簡(jiǎn)稱SPX1&2）之間存在著磷信號(hào)與磷平衡的負(fù)反饋調(diào)控途徑。
　　本實(shí)驗(yàn)室前期實(shí)驗(yàn)表明SPX1&2能通過結(jié)合PHR2的C端從而阻礙其與磷響應(yīng)基因順式作用元件P1BS序列的結(jié)合，起到負(fù)調(diào)控PHR2轉(zhuǎn)錄功能的作用。而SPX1

2、&2如何負(fù)調(diào)控PHR2的功能機(jī)制還尚不清楚。本研究進(jìn)一步通過體外實(shí)驗(yàn)探究SPX1&2兩個(gè)核蛋白對(duì)PHR2的負(fù)控機(jī)制。
　　本研究首先構(gòu)建了SPX1和SPX2融合GST標(biāo)簽的原核表達(dá)載體(pGEX-4T-1-SPX1和pGEX-4T-1-SPX2)，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在誘導(dǎo)劑異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)濃度1mmol/L，誘導(dǎo)溫度20℃，誘導(dǎo)時(shí)間16h時(shí)是原核蛋白表達(dá)的最適條件。體外Pull-down實(shí)驗(yàn)表明加磷酸鹽(+Pi)條件下，P1B

3、S探針濃度的增加不會(huì)影響SPX1&2與PHR2的結(jié)合，而在無磷酸鹽(-Pi)條件下，隨著P1BS濃度的增加，SPX1&2結(jié)合PHR2的能力變?nèi)酢Ｄz遷移(EMSA)實(shí)驗(yàn)表明+Pi條件下，隨著SPX1&2蛋白濃度的增加，競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合PHR2的能力也增強(qiáng)，檢測(cè)到P1BS自由探針的量增多，而在-Pi條件下，并無此效應(yīng)。磷濃度梯度實(shí)驗(yàn)表明SPX1&2競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合PHR2的能力會(huì)隨著體外磷酸鹽(+Pi)濃度的增加而增強(qiáng)。同時(shí)，我們也分析了加氮(+N)、加