1、目的：頸椎病(Cervical Spondylosis，CS)是近年來研究相當多的疾病。頸椎病的臨床表現(xiàn)具有多樣性，其分類方法也比較多，目前常用的分類方法是根據(jù)臨床表現(xiàn)，病因學等因素的不同可以把頸椎病分為脊髓型，神經根型，椎動脈型，混合型等多種類型。脊髓型頸椎病是由于頸椎間盤突出或者骨嵴突出壓迫脊髓而產生的一系列臨床癥狀和體征，其中比較明顯的包括手足無力，下肢發(fā)緊，行走不穩(wěn)，不能快走，上肢握力減退，持物易墜，四肢麻木，走路時有踩棉花感，

2、胸部有束帶感，部分病情嚴重者可以出現(xiàn)行走困難，二便失禁或者尿潴留，四肢癱瘓等。該型頸椎病與神經根型頸椎病的主要區(qū)別要點在于不一定出現(xiàn)上肢的放射性神經疼痛。頸椎病尤其是脊髓型頸椎病的病因目前公認的根源是頸椎間盤退變后椎體間松動，椎體緣產生骨贅(骨刺或者骨嵴)，或者椎間盤破裂突出等壓迫脊髓導致的。進一步的研究發(fā)現(xiàn)在椎間盤組織的退變過程中有患者表現(xiàn)為影像學上突出壓迫的程度比較輕，但是患者的癥狀比較重，動物實驗的結果已經證實炎癥反應可能與脊髓型

3、頸椎病的臨床表現(xiàn)有一定的關系。有作者認為在脊髓型頸椎病發(fā)病中炎癥反應及其相關的過程所產生的一系列炎癥因子可以刺激神經根和相應的脊髓節(jié)段，加重患者的臨床不適癥狀。但是其作用的具體的分子機制目前尚未明了。目前的研究發(fā)現(xiàn)包括轉化生長因子(TNF)-α、白細胞介素(IL)-1β、IL-6等在內的一系列炎癥因子可以介導炎癥反應，一般在炎癥反應前期有較高水平的表達，是目前公認的“前炎癥因子"。尤其是TNF-α目前對其的研究比較多，已經公認其介導炎癥

4、反應的作用，而且其作用的機理研究得也比較透徹，目前已經有相應的細胞因子藥物制劑抗TNF-α單克隆抗體(Infliximab，英夫利昔)獲得美國食品和藥品管理局(FDA)的批準用于治療包括類風濕性關節(jié)炎在內的一些炎癥因子表達過多的疾病。其在治療椎間盤突出癥上的應用目前國際上也有相應的短期使用臨床療效的報道，長期的報導未見。在對炎癥反應研究較多且其在腰椎間盤突出癥中的作用已經得到初步證實的前提下，本實驗旨在探討包括TNF-α、IL-1β、I

5、L-6在內的前炎癥因子在脊髓型頸椎病發(fā)病的早期變化水平，探討前炎癥因子與頸椎間盤早期退變的關系。為臨床上分析脊髓型頸椎病的病因和進一步指導治療提供依據(jù)。本實驗包括兩個部分，第一部分是動物實驗，第二部分是臨床病例研究。 分述如下：第一部分：動物實驗方法：通過在SD大鼠頸椎區(qū)域注射頸椎間盤后緣的骨原蛋白(BMP)可誘導椎間盤及韌帶組織骨化、椎體后緣骨質增生，并對頸脊髓造成恒定的慢性壓迫，形成脊髓型頸椎病的動物模型。本實驗選擇36只S

6、D大鼠按處理方法不同隨機分成2組，A組：18只為使用上述方法制作的動物模型<'1>，B組：18只健康的與A組同樣大小，在同等條件下飼養(yǎng)情況下的大鼠，作為對照組，也分別在A組動物造模后第4、8、16周與A組對稱性的處死動物，處理方法同A組。使用免疫組化的方法對實驗組織進行處理，分析。使用北航醫(yī)學病理圖象分析軟件對免疫組化的圖像進行定量分析。同時使用免疫組化的方法對手術中摘取的人的髓核組織進行神經生長因子(NGF)mRNA含量的測定。

7、 結果： 1．A組動物術后8周起出現(xiàn)運動功能減退；術后4周起出現(xiàn)椎體后緣骨質增生，占據(jù)椎管，并出現(xiàn)不同程度的脊髓受壓變形和脫髓鞘、神經元脫失等改變；表明術后4周脊髓型頸椎病的動物模型已經初步形成，而且到術后第8周的時候脊髓型頸椎病已經發(fā)展較重。 2．免疫組化的結果顯示，TNF-α在A組的細胞中主要以成纖維細胞、軟骨細胞及淋巴細胞表達為主，而且在術后第4周的時候已經有較高水平的表達，提示在脊髓型頸椎病模型建成的早期炎癥反

8、應的相關細胞因子就已經產生了，免疫組化的定量分析的結果顯示其產生的水平也快接近高峰的數(shù)值。TNF-α表達陽性的例數(shù)在術后第4周的時候是4例，術后第8周的時候陽性表達的例數(shù)是6例，術后16周的時候陽性表達的例數(shù)是6例。免疫組化北航醫(yī)學病理圖象分析軟件結果顯示A組TNF-α水平較B組增高，而且差異具有顯著性(P<0.05)。提示TNF-α作為前炎癥因子的一個重要組成成員在脊髓型頸椎病發(fā)病早期的表達中占有重要的地位，是炎癥反應的主要部分。

9、 3．IL-1β在A組中的分布也是以成纖維細胞、軟骨細胞和淋巴細胞為主，其中主要是淋巴細胞多見。在術后第4周的時候表達相對TNF-α較少，但在第8周的時候表達含量明顯增高，術后16周的時候表達含量也很高。 4．IL-6在實驗中的A組表達分布比較多見，在手術的過程中有一定的作用。手術后的表達含量較對照組明顯增高，兩組之間相比有統(tǒng)計學的差異。 第二部分：臨床病例研究方法：在臨床工作中收集整理病例資料，并對其進行歸納總結。

10、本實驗研究主要是從2004年5月到2005年1月之間，主要以河北醫(yī)科大學第三醫(yī)院脊柱外科收治的20例脊髓型頸椎病患者，這些患者在從最初出現(xiàn)不適的癥狀到就診的時間不超過1個月，收集其臨床癥狀，疾病導致的一系列體征，影像學檢查包括MRI和/或CT檢查的結果，并且分析其中的關系。詳細記錄此類患者的手術經過，和手術操作的方法，同一術者按照類似的操作規(guī)程，完整的摘除并且取出的32個頸椎節(jié)段的椎間盤及其髓核組織，作為A組的病例來源。此外，對照組B組

11、選擇由于車禍或者其他原因導致死亡的與同時期取自死亡時間<24 h的新鮮尸體中15個頸部椎間盤組織，作為對照組B組。將兩組收集整理的病理資料，手術中摘除的脊髓型頸椎病患者突出的頸部椎間盤組織和手術中摘取的無癥狀的椎間盤組織進行對比研究，采用雙盲的原則，采用4％的多聚甲醛進行固定，按照規(guī)范的免疫組化實驗操作規(guī)程對所有的椎間盤髓核組織中的部分細胞因子的含量進行檢測，主要是觀察其中TNF-α、IL-1β、IL-6的表達陽性例數(shù)，使用北航醫(yī)學病理

12、圖象分析軟件對免疫組化的結果進行分析處理，比較各組病例資料在椎間盤組織中的含量表達的差異。結果： 1．實驗組32個頸部突出椎間盤組織中,TNF-α表達陽性分別為15例，對照組15個正常椎間盤組織中表達的陽性細胞較少。進行統(tǒng)計學分析結果有差異性(P<0.05)。 2．實驗組32個頸部突出椎間盤組織中，IL-1β表達陽性分別為12例，對照組15個正常椎間盤組織中表達的陽性細胞較少。進行統(tǒng)計學分析結果有差異性(P<0.05)。

13、 3．實驗組32個頸部突出椎間盤組織中，IL-6表達陽性分別為11例。對照組15個正常椎間盤組織中表達的陽性細胞較少。進行統(tǒng)計學分析結果有差異性(P<0.05)。 4．實驗組32個頸部突出椎間盤組織中,TNF-α、IL-1β、IL-6均有很多的陽性表達例數(shù)，而且其中12例為4種細胞因子均表達陽性。對照組15個正常椎間盤組織中表達的陽性細胞較少。進行統(tǒng)計學分析結果有差異性(P<0.05)。 5．免疫組化的圖像經過北