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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
通過(guò)研究過(guò)敏性紫癜患者外周血單個(gè)核細(xì)胞基因組DNA甲基化狀態(tài)、IL-2RG基因表達(dá)及其甲基化狀態(tài),從而探討過(guò)敏性紫癜的表觀遺傳學(xué)改變。
方法:
(1)密度梯度離心分離正常人、病人的外周血單個(gè)核細(xì)胞;試劑盒提取RNA和DNA;
(2)整體甲基化定量試劑盒檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞中基因組DNA甲基化水平;
(3)實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(quantitative real
2、-time PCR)檢測(cè)DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNMT)和甲基結(jié)合蛋白(MBD)的mRNA的表達(dá)水平;
(4)甲基化特異性聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)IL-2RG啟動(dòng)子區(qū)域DNA甲基化水平,實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞中IL-2RG的mRNA表達(dá)。
結(jié)果:
(1)與正常對(duì)照組相比,過(guò)敏性紫癜患者外周血單個(gè)核細(xì)胞基因組DNA高甲基化(P=0.041),而基因組DNA甲基化水平與過(guò)敏性紫癜患者活動(dòng)性評(píng)分
3、之間沒(méi)有明顯相關(guān)性;且不同類型的過(guò)敏性紫癜患者之間基因組DNA甲基化水平亦沒(méi)有明顯差異(P>0.05)。
(2)過(guò)敏性紫癜患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中DNMT1,DNMT3b和MBD1mRNA水平較正常對(duì)照組明顯升高(P=0.001,P=0.0001,P=0.014),MBD2及MBD4的mRNA水平明顯降低(P=0.013,P=0.001)。過(guò)敏性紫癜患者DNMT3b的mRNA表達(dá)量與基因組DNA甲基化水平呈正相關(guān)(R=0.5
4、03,P=0.043)。
(3)過(guò)敏性紫癜患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中IL-2RG的mRNA水平較正常對(duì)照組明顯升高(P=0.018),IL-2RG啟動(dòng)子區(qū)域的甲基化水平較正常對(duì)照組明顯降低(P=0.048)。外周血單個(gè)核細(xì)胞中IL-2RG的mRNA的水平與IL-2RG啟動(dòng)子區(qū)域甲基化水平呈負(fù)相關(guān)(R=0.549,P=0.01)。
結(jié)論:
過(guò)敏性紫癜患者外周血單個(gè)核細(xì)胞基因組DNA高甲基化,且可能與D
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