1、幾丁質(zhì)及其衍生物經(jīng)幾丁質(zhì)酶降解，產(chǎn)生一些幾丁寡糖，能止血抗凝、抗腫瘤轉(zhuǎn)移、降低血壓，促進有益微生物(如雙歧桿菌)生長；還能激活巨嗜細胞，誘導細胞因子產(chǎn)生，提高機體免疫力；另能刺激成纖維細胞增殖，有利于膠原沉積，與細胞外基質(zhì)成分結合，促進組織修復。此外，幾丁寡糖還有抗菌防腐、保水保濕等功效。在醫(yī)藥、化妝品等行業(yè)具有廣泛的開發(fā)前景。 本研究的目的是探索利用大腸桿菌和枯草芽孢桿菌系統(tǒng)來表達來自于蘇云金芽孢桿菌的幾丁質(zhì)酶基因。本文通過P

2、CR的方法從蘇云金芽孢桿菌的染色體上擴增得到幾丁質(zhì)酶基因chiA，通過測序鑒定與報道的蘇云金芽孢桿菌konkukian亞種的幾丁質(zhì)酶基因的序列完全一致。分別構建表達載體pET-28a-chiA和pHSG-chiA，將它們分別在大腸桿菌和枯草芽孢桿菌中表達。通過酶活的測定在兩種重組菌中都檢測到了酶活。同時對重組芽孢桿菌所產(chǎn)的重組酶的酶學性質(zhì)作了初步的研究。重組酶的最適作用溫度大約在50℃，30℃-60℃為酶的穩(wěn)定溫度范圍，同時將酶60℃保

3、溫30min，仍然保持約80％的酶活力。最適作用pH約7.0，酶的穩(wěn)定pH范圍為4-8。考察發(fā)現(xiàn)pET-28a-chiA在大腸桿菌中穩(wěn)定性較好，而對于芽孢桿菌表達載體pHSG-chiA在傳代過程中發(fā)生質(zhì)粒丟失的現(xiàn)象，無選擇壓力下連續(xù)轉(zhuǎn)接5次，幾乎全部發(fā)生丟失。 對重組菌的發(fā)酵條件進行了初步的優(yōu)化，分別考察了碳源、氮源、培養(yǎng)基初始pH、裝液量、接種量以及誘導時機對產(chǎn)酶的影響。得到了最終的優(yōu)化培養(yǎng)基，其成分為：幾丁質(zhì)2％，酵母膏2.