1、低溫保存技術是一種長時間保存細胞和組織的有效方法，在許多領域都得到了廣泛的應用。而臨床醫(yī)學的發(fā)展和需求，使得工程組織和生物活體器官的低溫保存成為當今生物醫(yī)學工程研究的最前沿課題。目前在全球進行的移植手術中，骨移植的數(shù)量僅次于輸血居第二位。若能將低溫保存技術成功應用于保存治療大體積骨缺損所需的組織工程骨，則可使骨缺損的臨床治療更加便利，大大減輕病人的痛苦和損失。因此，組織工程骨的超低溫保存有著輝煌的發(fā)展前景和廣泛的應用價值。 本文

2、首先對來自Sprague-Dawley(SD)大鼠顱蓋骨的細胞進行了原代和傳代培養(yǎng)，并對其形態(tài)學及特異性等生物學性能進行了檢測，確定所培養(yǎng)的細胞是成骨細胞，并通過純化確保沒有其他細胞的污染，為后續(xù)的實驗提供數(shù)量充足的骨組織工程種子細胞，也為實驗的準確性和可重復性提供了保證。 接著，應用顯微攝像技術測定細胞的體積變化，實驗確定了成骨細胞的滲透不變體積比為0.261，實驗回歸確定了成骨細胞對于DMSO的K-K模型滲透參數(shù)為：L<,p

3、>=1.8×10<'-13>m<'3>·N<'-1>·s<'-1>；ω=8.5×10<'-11>mol·N<'-1>·s<'-1>；σ=1.5。 利用實驗得到的K-K模型的參數(shù)，對成骨細胞的DMSO導入過程細胞體積的變化進行模擬優(yōu)化，研究了導入過程對細胞損傷的機制和控制方法。結果表明，低濃度保護劑導入過程體積損傷和滲透損傷很小，可以采用一步導入法。高濃度保護劑導入，分步導入和連續(xù)梯度導入皆優(yōu)于一步導入，都能顯著減輕保護劑導入過程