1、目的：應用焦磷酸測序法檢測晚期非小細胞肺癌(NSCLC)患者血漿和腫瘤組織中EGFR和KRAS基因突變狀況，分析血漿樣本是否可作為腫瘤組織的良好替代；研究NSCLC患者血漿EGFR和KRAS基因突變與表皮生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑(EGFR-TKI)治療療效的關系；分析NSCLC患者血漿EGFR和KRAS基因突變與臨床預后的關系。
　　 方法：收集晚期NSCLC患者的外周血樣本146例、組織樣本64例，其中血漿與組織配對者共4

2、0例。采用巢式PCR法擴增KRAS基因第2外顯子，酶切富集PCR(ME-PCR)擴增血漿EGFR基因的19、20和21外顯子，對PCR產(chǎn)物進行焦磷酸測序。并進行Kaplan-Meier生存分析。
　　 結果：
　　 1.64例晚期NSCLC腫瘤組織中檢測到EGFR基因突變22例，突變率為34.38%；KRAS基因突變3例，突變率為4.69%。
　　 2.對99例晚期NSCLC血漿樣本進行了EGFR基因檢測，發(fā)現(xiàn)E

3、GFR基因突變24例，突變率為24.24%(24/99)，與組織樣本EGFR基因突變率相比，無統(tǒng)計學差異(P=0.16)。對全部146例晚期NSCLC血漿樣本進行了KRAS基因檢測，發(fā)現(xiàn)KRAS基因突變9例，突變率為6.16%(9/146)，與組織樣本KRAS基因突變率相比，無統(tǒng)計學差異(P＝0.919)。
　　 3.對40例血漿和組織配對樣本進行基因檢測，發(fā)現(xiàn)組織EGFR突變15例，血漿EGFR突變13例，其中11例突變在組織

4、和血漿中同時檢測到，兩種樣本EGFR基因檢測的一致性為85.0%(34/40)。以組織基因檢測為金標準，血漿EGFR突變檢測的靈敏度為73.33%(11/15)，特異度為92%(23/25)。在40例組織中檢測到KRAS突變1例，配對的血漿中未檢測到KRAS突變。血漿和組織中KRAS基因突變檢測一致性為97.5%(39/40)。
　　 4.晚期NSCLC腫瘤組織和血漿中EGFR突變與臨床病理特征的關系：晚期NSCLC患者組織中的

5、EGFR突變與吸煙史、腫瘤類型間有顯著統(tǒng)計學意義。非吸煙患者EGFR突變率明顯高于吸煙患者(P=0.013)，腺癌中EGFR突變率明顯高于非腺癌(P=0.022)。女性患者的EGFR突變率(47.83%)高于男性(26.839%)，統(tǒng)計學差異不甚明顯(P=0.09)。但組織EGFR突變率與年齡(P=0.913)、PS評分(P=0.702)、臨床分期(P=0.164)間均無統(tǒng)計學意義。晚期NSCLC患者血漿中EGFR基因突變與年齡、性別、

6、腫瘤類型、分期、吸煙史、PS評分的相關性分析中均未發(fā)現(xiàn)顯著統(tǒng)計學差異(P>0.05)。
　　 5.晚期NSCLC腫瘤組織和血漿中KRAS檢測與臨床病理特征的關系：晚期NSCLC患者腫瘤組織和血漿中KRAS基因突變與年齡、性別、腫瘤類型、分期、吸煙史、PS評分的相關性分析中均未發(fā)現(xiàn)顯著統(tǒng)計學差異(P>0.05)。
　　 6.接受TKI治療的患者共有38例，血漿EGFR突變者的疾病控制率(DCR)和客觀緩解率(ORR)分別為

7、90%(9/10)和60%(6/10)，EGFR野生型患者的DCR和ORR分別為(53.57%，15/28)和(17.86%，5/28)。血漿EGFR基因是否突變，與TKI治療療效有關(DCR，P=0.059；ORR，P=0.019)。
　　 7.接受TKI治療的患者中，血漿KRAS野生型患者的DCR和ORR(66.67%，22/33；33.33%，11/33)高于KRAS突變患者(40%，2/5；0%，0/5)。但統(tǒng)計學差異不

8、明顯(DCR，P=0.337；ORR，P=0.295)。
　　 8.接受TKI治療的患者，總體中位PFS為6個月，EGFR基因19和21外顯子突變的患者中位PFS為10.5個月，較EGFR野生型患者的中位PFS(5.1個月)顯著延長，但統(tǒng)計學意義不明顯(P=0.228)。KRAS突變的患者病情進展較快，其中位PFS僅為2.5個月，明顯小于KRAS野生型患者的PFS(9個月)，兩組患者PFS具有顯著統(tǒng)計學差異(P=0)。
　

9、　 結論：
　　 1、晚期NSCLC血漿和組織中EGFR和KRAS基因突變具有高度的一致性，血漿樣本可以作為組織樣本的良好替代。
　　 2、焦磷酸測序技術具有操作簡便、高通量檢測的特點，與ME-PCR的結合可有效富集突變型EGFR基因，可以準確檢測出血漿EGFR和KRAS基因突變，可用于篩選適合TKI治療的NSCLC患者，有利于指導NSCLC患者的個體化用藥。
　　 3、晚期NSCLC組織中EGFR突變更多見于