1、自上世紀50年代初磺脲類降糖藥(Sulfonylurea Drug，SuD/SUs)用于臨床以來，每年約有5％～10％接受其治療的糖尿病患者產(chǎn)生藥物繼發(fā)失效，五年失效率達50％，其發(fā)生原因及機制還未明確，對此學者們從不同角度進行了研究，其中有關(guān)胰島β細胞淀粉樣蛋白沉積導致胰島素分泌障礙，使SUs繼發(fā)失效的學說引起關(guān)注。胰淀素(Amylin)的生理功能尚不完全清楚，但已發(fā)現(xiàn)在高糖刺激下其分泌量遠遠超過胰島素，局部胰淀素濃度增高成為胰島內(nèi)淀

2、粉樣蛋白形成的前提，有報道高濃度胰淀素抑制大鼠胰島細胞分泌胰島素，使SUs促胰島細胞分泌胰島素作用減弱，因此認為胰淀素分泌異常是導致胰島β細胞分泌功能障礙、SUs繼發(fā)失效的原因之一。本研究應(yīng)用全細胞膜片鉗技術(shù)觀察了胰淀素對胰島βTC3細胞ATP敏感性鉀通道(ATP-sensitive Potassium Channels，K+-ATPchannels)的影響，探討其影響胰島素分泌及SUs作用的機制。 目的：應(yīng)用全細胞膜片鉗技術(shù)，

3、在單個細胞水平上觀察胰島βTC3細胞K+-ATP通道的電學特性、胰淀素對葡萄糖和SUs對該通道作用的影響。 方法：胰島βTC3細胞系復蘇后，選擇有光澤、形態(tài)良好的直徑約10-15μm的細胞進行膜片鉗實驗。當封接電阻達1GΩ以上時吸破細胞膜，補償電容、電流及串聯(lián)電阻，形成全細胞記錄模式，設(shè)置鉗制電壓為—40mV，每隔1分鐘給予細胞一系列不同去極化電壓刺激后記錄電流及圖形，在不同實驗條件觀察電流及圖形的變化。電刺激脈沖的給出及數(shù)據(jù)采

4、入等均通過Pulse軟件包和DAQ-2B數(shù)據(jù)采集接口裝置一起構(gòu)成的IBBDigitizer數(shù)字化系統(tǒng)完成，采集信號均經(jīng)5kHz濾波后輸入計算機處理，所有電流數(shù)據(jù)均經(jīng)P/N漏減處理，用t檢驗進行統(tǒng)計學分析，以均數(shù)±標準差(-x±S)表示，P<0.05為差異顯著，P<0.01為差異極顯著。 結(jié)果： 1.建立了單個胰島βTC3細胞膜上K+-ATP通道的檢測方法：選擇出適合檢測胰島βTC3細胞膜上K+-ATP通道的細胞外液及電極

5、內(nèi)液，確定了全細胞膜片鉗實驗的參數(shù)。 2.觀察了5mmol/L葡萄糖和16.7mmol/L葡萄糖時胰島βTC3細胞膜上K+-ATP通道電流的情況以及優(yōu)降糖作用后該通道的變化：在5mmol/L葡萄糖作用下，胰島βTC3細胞膜上K+-ATP通道電流呈弱的內(nèi)向整流性質(zhì)，其電流存在時間依賴性失活，16.7mmol/L葡萄糖可使電流降低；3nmol/L優(yōu)降糖可使K+-ATP通道電流減小。 3.0.1、1、10μmol/L胰淀素對5

6、mmol/L葡萄糖條件下胰島βTC3細胞膜上K+-ATP通道的影響與對照組比無明顯變化。10μmol/L胰淀素使16.7mmol/L葡萄糖作用下的K+-ATP通道最大電流減低程度降低，與對照組相比具有統(tǒng)計學意義；10μmol/L胰淀素使3nmol/L優(yōu)降糖作用下的K+-ATP通道最大電流減低程度降低，與對照組相比具有統(tǒng)計學意義。 結(jié)論： 1.葡萄糖，優(yōu)降糖是使胰島βTC3細胞膜上K+-ATP通道關(guān)閉的物質(zhì)。 2.