1、人類免疫缺陷病毒1型（Human Immunodeficiency Virus Type1，HIV-1）與丙型肝炎病毒（Hepatitis C Virus，HCV）合并感染的臨床治療和相關致病機制研究是目前臨床面臨的難題和研究熱點。由于HIV-1和HCV的傳播途徑相同，均通過血液及血液制品、性途徑、母嬰途徑傳播，HIV-1/HCV合并感染的現(xiàn)象非常普遍。隨著高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療(Highly Active Anti-Retroviral

2、 Therapy,HAART)在艾滋病中的廣泛和規(guī)范應用，機會性感染的發(fā)病率和死亡率都已顯著下降，而合并HCV感染所致的肝損害已經(jīng)成為艾滋病患者死亡的主要原因之一；抗HCV治療的低有效率和HAART治療中不良反應的增加；中國國內(nèi)流行的HCV基因型及準種復雜而又難治，這些都使得對HIV-1/HCV合并感染者的治療更加棘手。但究其原因，至今并不完全明了，很有必要從病毒學和免疫學角度對HIV-1/HCV合并感染者進行深入研究。
　　既往

3、很多研究已證實細胞因子在HIV-1感染疾病進展過程中發(fā)揮了重要的作用，有研究表明：在HIV-1感染過程中IL-4可抑制體內(nèi)的病毒水平，IL-7對維持淋巴細胞的存活發(fā)揮了重要的作用，IL-17可能參與HIV-1病毒的免疫反應，IL-21可以促使 CD8+T細胞增殖及保持活性，IFN-γ是機體免疫系統(tǒng)抵抗病毒感染的重要細胞因子之一。我們推測合并HCV感染會對HIV-1感染者上述細胞因子產(chǎn)生影響，而有關HCV合并感染對HIV-1感染者上述細胞

4、因子的影響闡述得并不多，所以有必要對HCV合并感染對HIV-1感染者上述細胞因子的分泌狀況展開研究。
　　既往有關HIV-1感染和HCV感染的特異性細胞免疫應答的研究，結(jié)果均提示特異性CTL反應對HIV-1感染和HCV感染的控制均具有重要作用，國內(nèi)外也有少部分關于 HIV-1/HCV合并感染者的特異性細胞免疫應答的研究報道。但由于地域和種族的差異，有必要對華南地區(qū) HIV-1/HCV合并感染者的特異性細胞免疫應答進行研究。前期我們

5、用ELISPOT方法檢測HIV-1感染者的CD8+T細胞對HIV-1合成表位的免疫主導應答發(fā)現(xiàn)：HIV-1 Gag區(qū)域肽段誘導產(chǎn)生的CD8+T細胞的IFNγ分泌細胞頻率最高。故我們選用HIV-1 P24區(qū)域（Gag133~191）的氨基酸序列人工合成的12個重疊肽段組成的肽段庫作為特異性肽段表位，對HIV-1/HCV合并感染者和HIV-1感染者的HIV-1特異性CTL應答進行研究。
　　實驗一:HIV-1單純及合并HCV感染的CD

6、4+T細胞、CD8+T細胞及PBMC內(nèi)IL-7、IL-21、IFN-γmRNA水平測定
　　實驗對象：以中國華南地區(qū)的已HAART治療的25例HIV-1單純感染和22例HIV-1/HCV合并感染者，及20例健康對照者為研究對象。
　　實驗方法：分別采用免疫磁珠分選技術(shù)、實時熒光定量PCR方法，以上述HIV-1 P24區(qū)域重疊肽段庫作為HIV-1特異性肽段表位，刺激從上述三組研究對象的外周血單個核細胞（PBMC）分選出的CD4

7、+T淋巴細胞，CD8+T淋巴細胞，分別檢測CD4+T淋巴細胞、CD8+T淋巴細胞及PBMC在刺激前后IL-7、IL-21、IFN-γ，β-actin的mRNA水平，統(tǒng)計IL-7、IL-21、IFN-γ與β-actin的比值，并用單因素方差分析方法進行統(tǒng)計分析。
　　實驗結(jié)果：已接受HAART治療的HIV-1單純感染組和HIV-1/HCV合并感染組及健康對照組細胞內(nèi)IFN-γ、IL-7、IL-21的mRNA水平比較。
　　P2

8、4抗原表位刺激培養(yǎng)后，HIV-1單純感染組CD8+T細胞的IFN-γ mRNA水平明顯高于CD4+T細胞（P<0.05）。無論有無P24特異性抗原表位刺激，健康對照組PBMC中IFN-γ的mRNA水平均明顯高于HIV-1單純感染組和HIV-1/HCV合并感染組（P<0.05）； P24抗原表位刺激后，HIV-1/HCV合并感染組PBMC中IL-7 mRNA水平明顯高于HIV-1單純感染組（P<0.05）；無論有無P24特異性抗原表位刺激

9、，各組PBMC中 IL-21mRNA水平相比均無明顯差異（P>0.05）。
　　實驗二：ICS檢測HIV-1單純及合并HCV感染者分泌IL-4，IL-17A，IL-21，IL-21R，IFN-γ的CD3+T淋巴細胞比例
　　實驗對象：以未HAART治療的24例HIV-1單純感染者和21例HIV-1/HCV合并感染者，及20例健康對照組為研究對象。
　　實驗方法：采用細胞內(nèi)細胞因子染色法（intra-cellular C

10、K staining，ICS），以上述HIV-1 P24區(qū)域重疊肽段庫作為特異性肽段表位，刺激上述研究對象的PBMC，檢測使用與未使用P24抗原表位刺激后細胞內(nèi)分泌IL-4、IL-17A、IL-21、IL-21R、IFN-γ的CD3+T淋巴細胞比例，并用單因素方差分析方法進行統(tǒng)計分析。
　　實驗結(jié)果：未接受HAART治療的HIV-1單純感染組和HIV-1/HCV合并感染組及健康對照組細胞內(nèi)分泌IL-4、IL-17A、IFN-γ、I

11、L-21、IL-21R的T淋巴細胞比例比較
　　比較使用與未使用P24抗原表位刺激后的結(jié)果顯示，三組T淋巴細胞內(nèi)的分泌IL-4、IL-17A、IFN-γ、IL-21、IL-21R的比例變化不顯著（P>0.05）。在無P24抗原表位刺激培養(yǎng)后，HIV-1單純感染組的CD3+IL-4+/T淋巴細胞明顯高于健康對照組（P<0.05），HIV-1/HCV合并感染組CD3+IL-4+/T淋巴細胞也高于健康對照組，但差異不顯著（P>0.05）

12、；而在P24抗原表位刺激培養(yǎng)后，三組CD3+IL4+/T淋巴細胞差異不顯著（P>0.05）。無論有無P24抗原表位刺激培養(yǎng)，HIV-1單純感染組 CD3+IL17-A+/T淋巴細胞>HIV-1/HCV合并感染組>健康對照組，且HIV-1單純感染組明顯高于其他兩組（P<0.05）；HIV-1單純感染組CD3+IFN-γ+/T淋巴細胞>HIV-1/HCV合并感染組>健康對照組，三組差異不顯著（P>0.05）；三組CD3+IL-21+/T淋巴

13、細胞差異不顯著（P>0.05）；HIV-1單純感染組CD3+IL-21R+/T淋巴細胞比例>健康對照組>HIV-1/HCV合并感染組，HIV-1單純感染組明顯高于其他兩組（P<0.001）。
　　實驗三：ELISPOT檢測HIV-1單純及合并HCV感染的HIV-1特異性細胞免疫應答
　　實驗對象：以上述實驗一和實驗二中的單純感染者和合并感染者為研究對象。
　　實驗方法：采用酶聯(lián)免疫斑點吸附技術(shù)（enzyme-linke

14、d immunosorbent spot，ELISPOT），以上述HIV-1 P24區(qū)域重疊肽段庫作為特異性肽段表位，分別檢測研究對象PBMC中HIV-1特異性CTL應答頻數(shù)，并用卡方檢驗方法進行統(tǒng)計分析。分析合并HCV感染對HIV-1感染細胞免疫的影響，HAART對HIV-1感染細胞免疫的影響。
　　實驗結(jié)果：HIV-1單純感染組和HIV-1/HCV合并感染組HIV-1特異性CTL應答比較
　　已接受HAART治療HIV-

15、1單純感染組HIV-1特異性細胞免疫應答率（13/25）明顯高于HIV-1/HCV合并感染組（5/22）（P<0.05）；未接受HAART治療HIV-1單純感染組 HIV-1特異性細胞免疫應答率（8/22）高于HIV-1/HCV合并感染組（6/21），但差異不顯著（P>0.05）；已治療單純感染組的HIV-1特異性細胞免疫應答率（13/25）高于未治療單純感染組（8/22），但差異不顯著（P>0.05）；已治療合并感染組HIV-1特異性

16、細胞免疫應答率（5/22）與未治療合并感染組（6/21）的相比無明顯差異（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.合并HCV感染可能使HIV-1感染者HIV-1特異性細胞免疫應答水平下降，這可能是HIV-1/HCV合并感染者HAART治療療效差的原因之一。
　　2.細胞因子IL-7、IL-17、IL-21R在HIV-1特異性細胞免疫中發(fā)揮重要作用。HIV-1感染還可以通過Th17和Tfh途徑影響感染者的細胞免疫，而HCV