1、格氏梅拉菌是一種擔子菌類酵母樣無性態(tài)真菌，屬于黑粉菌綱外擔子菌亞綱。本研究室從毛竹種子分離出兩株新的格氏梅拉菌菌株（PM1和PM2），觀察到PM1和PM2具有不同的菌落形態(tài)，顯微鏡下觀察PM1只能形成很短的胞鏈，而PM2形成帶有分支的完整菌絲。由于菌絲的形成往往和真菌侵染寄主的能力相關，本研究進一步采用抑制消減雜交技術構建兩個格氏梅拉菌的差異表達cDNA文庫，分離出菌絲形成相關基因片段。并以黑粉菌研究模型玉米黑粉菌為對象，構建了一個根癌

2、農桿菌介導的轉化體系。針對消減文庫獲得的cDNA片段，設計了一系列載體進行格氏梅拉菌表達基因抑制研究。取得了以下主要研究成果:
　　1.構建了菌絲形態(tài)差異的兩個格氏梅拉菌的正向和反向消減cDNA文庫，每個文庫都得到上千菌落。從PM1消減PM2文庫中挑選測序后得到10條EST序列，經過同源性分析有7個片段與其它真菌基因具有較高的相似性。其中包括了真菌菌絲形成或者真菌形態(tài)相關的蛋白，如熱休克蛋白、錳超氧化物歧化酶、泛素-核糖體蛋白、核

3、糖體蛋白，推測這些基因表達差異可能影響了格氏梅拉菌菌絲的形成和菌株的致病性。
　　2.建立和優(yōu)化了簡單高效的根癌農桿菌介導的玉米黑粉菌轉化體系，發(fā)現(xiàn)乙酰丁香酮、誘導和共培養(yǎng)基的pH值、共培養(yǎng)溫度、農桿菌濃度等因素與轉化效率有關。當農桿菌用200uM乙酰丁香酮誘導6h之后搖床培養(yǎng)至OD6000.5，黑粉菌培養(yǎng)至OD6000.5時，各取100ul菌液在pH5.3的共培養(yǎng)基上22℃培養(yǎng)2天之后，轉化效率最高。該轉化體系不僅針對玉米黑粉菌

4、，而且能夠用于其它黑粉菌類如大麥堅黑粉菌等的轉化，也為下一步結合差減cDNA文庫在格氏梅拉菌中進行基因表達抑制研究奠定了基礎。
　　3.構建了一系列黑粉菌通用農桿菌轉化載體。以PPK2載體為骨架，通過Clontech的In-Fusion(R) PCR技術，擺脫酶切位點的限制，能夠自由選擇不同類型的真菌啟動子和真菌抗性基因，構建一套方便多樣的農桿菌表達和干涉載體。
　　本研究取得的結果為進一步開展格氏梅拉菌和大麥黑粉菌等黑粉菌