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文檔簡(jiǎn)介
1、電磁脈沖(Electromagneticpulse,EMP)作為一種特殊的高能復(fù)合電磁波,應(yīng)用領(lǐng)域不斷擴(kuò)展,其生物學(xué)效應(yīng)和相關(guān)的作用機(jī)制已經(jīng)成為國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究的熱點(diǎn)之一。免疫系統(tǒng)是機(jī)體抵御外來(lái)侵襲和損傷的主要防御體系,通過(guò)抗原的識(shí)別和應(yīng)答,免疫防御、免疫監(jiān)視和免疫自穩(wěn)等機(jī)制維持機(jī)體的穩(wěn)態(tài)。因此研究電磁輻射對(duì)免疫系統(tǒng)的作用具有重要的意義。既往研究發(fā)現(xiàn),電磁輻射對(duì)各種免疫細(xì)胞的增殖和凋亡和功能有不同程度的影響。目前有關(guān)電磁脈沖對(duì)T淋巴細(xì)胞作
2、用的相關(guān)研究報(bào)道不多。
目的:探討電磁脈沖對(duì)T淋巴細(xì)胞的影響及機(jī)制。
方法:
一、在體實(shí)驗(yàn)
選用電磁脈沖輻射源(場(chǎng)強(qiáng)200kV/m,脈沖前沿3.5ns,脈寬14ns,重復(fù)頻率1Hz)對(duì)雄性BALB/c小鼠進(jìn)行輻照,每天照射400次,連續(xù)照射7天,于照后不同時(shí)間處死小鼠觀察以下指標(biāo):
1.取胸腺和脾臟,用HE染色法觀察其組織形態(tài)的改變;
2.處死前稱取小鼠的體重、處死后對(duì)胸腺和脾
3、臟進(jìn)行稱重,計(jì)算胸腺、脾臟指數(shù);提取胸腺和脾臟淋巴細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù),觀察淋巴細(xì)胞數(shù)量的變化;
3.通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)脾臟淋巴細(xì)胞中的T、B淋巴細(xì)胞比例的變化;
4.通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)脾臟淋巴細(xì)胞的凋亡和細(xì)胞周期的改變;
5.通過(guò)Migrationassay實(shí)驗(yàn)法檢測(cè)EMP照射不同次數(shù)(0次、100次、200次、400次),照后不同時(shí)間(1、3、7、14、28天),脾臟淋巴細(xì)胞遷移能力的變化;
6.通過(guò)
4、ELISA法檢測(cè)脾臟組織液中的SDF-1的表達(dá)水平;
7.通過(guò)Westernblotting實(shí)驗(yàn)檢測(cè)脾臟淋巴細(xì)胞p-AKT的表達(dá)水平。
二、離體細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
用相同的EMP源輻照J(rèn)urkatT細(xì)胞,觀察以下指標(biāo):
1.EMP照射0次(對(duì)照組)、100次、200次、400次;照后0h(對(duì)照組)、1h、3h、6h、12h、24h,通過(guò)Migrationassay檢測(cè)JurkatT細(xì)胞遷移能力的變化;
5、> 2.用流式細(xì)胞儀檢測(cè)EMP照后JurkatT細(xì)胞膜上CXCR4的表達(dá)水平的改變;
3.用Westernblotting法檢測(cè)JurkatT細(xì)胞PI3K、p-AKT、PAK1、Rac1表達(dá)水平的變化。
4.采用ELISA方法檢測(cè)JurkatT細(xì)胞IL-4和IFN-γ表達(dá)水平的變化。
結(jié)果:
1.BALB/c小鼠在EMP輻照后,(1)胸腺結(jié)構(gòu)沒(méi)有顯著的變化;輻照3天后,脾臟血竇擴(kuò)張,充血明顯,脾
6、小體結(jié)構(gòu)不清;(2)胸腺指數(shù)變化沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;脾臟指數(shù)呈現(xiàn)先增后減的趨勢(shì),在照后第3、7天輻照組的脾臟指數(shù)高于對(duì)照組;胸腺淋巴細(xì)胞數(shù)的變化與對(duì)照組沒(méi)有顯著差異;脾臟淋巴細(xì)胞數(shù)在照后第3和7天,輻照組淋巴細(xì)胞數(shù)多于對(duì)照組;(3)輻照組脾臟中的T淋巴細(xì)胞數(shù)與對(duì)照組相比顯著增加,B淋巴細(xì)胞數(shù)改變不顯著;(4)輻照組和對(duì)照組脾臟淋巴細(xì)胞的凋亡數(shù)量和細(xì)胞周期的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;(5)400次EMP輻照組的淋巴細(xì)胞的遷移能力與對(duì)照組相比明顯增加
7、,照后1、3、7天脾臟淋巴細(xì)胞遷移能力增強(qiáng);(6)EMP輻照后脾臟中的SDF-1表達(dá)量升高;(7)脾臟淋巴細(xì)胞的p-AKT的表達(dá)也相應(yīng)的增加。
2.JurkatT細(xì)胞在EMP輻照后,(1)200次EMP輻照組的細(xì)胞遷移能力增加顯著;照后1h、3h、6h的細(xì)胞趨化能力與對(duì)照組相比增加明顯;(2)輻照后6h,JurkatT細(xì)胞表面CXCR4的表達(dá)量高于對(duì)照組;(3)JurkatT細(xì)胞PI3K、p-AKT、PAK1、Rac1表達(dá)水平
8、的變化與趨化能力的時(shí)間變化特征基本一致;(4)JurkatT細(xì)胞的IL-4的表達(dá)在照后3h、6h增高;IFN-γ在照后1h、3h、6h表達(dá)增加。
結(jié)論:在本實(shí)驗(yàn)條件下,電磁脈沖對(duì)雄性BALB/c小鼠胸腺的作用不敏感,但對(duì)脾臟作用顯著。脾臟的組織結(jié)構(gòu)遭到一定的破壞;脾臟重量增大,脾臟淋巴細(xì)胞數(shù)量增加,增加的主要是T淋巴細(xì)胞;但是淋巴細(xì)胞的凋亡和細(xì)胞周期沒(méi)有顯著的改變;脾臟中的趨化因子表達(dá)增加,脾臟淋巴細(xì)胞的遷移能力增強(qiáng)。Jurk
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