坦布蘇病毒SDS-70株弱毒苗的制備及安全性與免疫效力的初步評價.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、鴨坦布蘇病毒感染(TMUV infection)是2010年我國新發(fā)的一種急性傳染性疾病。TMUV屬于黃病毒科,黃病毒屬,恩塔亞病毒群。TMUV可感染危害多個品種的鴨,主要造成5-15日齡的雛鴨食欲減退、生長緩慢和神經癥狀,死淘率可達5%-10%,育成鴨感染后臨床癥狀輕微,死亡率較低,產蛋鴨的產蛋率大幅下降,產蛋率從90%降至10%以下,該病的發(fā)生給我國養(yǎng)禽業(yè)造成了巨大的經濟損失。
  免疫預防是防控TMUV感染的重要措施之一,本

2、研究利用實驗室分離到的TMUV SDS株進行傳代致弱,利用致弱毒株SDS-70株對雛鴨進行免疫,對其免疫保護效果進行了評價。
  本研究對從山東省某種鴨場分離的一株TMUV,采用SPF鴨胚和SPF雞胚進行交替?zhèn)鞔晒χ氯踉摱局辍Λ@得的不同代次的傳代病毒進行致弱效果分析,對不同代次的弱毒株進行免疫效果比對,結果顯示SDS-70具有較好的免疫原性。
  對篩選到的SDS-70傳代毒株進行免疫效力的評價。7日齡櫻桃谷鴨(無TMU

3、V母源抗體),每只腿肌注射102.46EID50的SDS-70的弱毒疫苗,20日齡進行第2次免疫,在2免后一周,利用同源強毒SDS-10對免疫組和對照組分別進行攻毒,攻毒劑量為1mL(102.9ELD50)。免疫后,觀察各組精神狀態(tài)并記錄;定期采血檢測抗體水平;定期采集免疫組與同居感染組的泄殖腔棉試子,利用熒光定量RT-PCR方法進行排毒情況的檢測;定期剖殺,采集各組織器官進行帶毒情況檢測與病理組織學研究。結果免疫組和對照組均精神狀態(tài)良

4、好,無明顯的臨床癥狀和病理變化,無發(fā)病和死亡情況。病理組織學檢測結果顯示,脾臟出現出血,后期出血減輕,心肌出現輕微水腫現象,其余各組織器官均無明顯的病理學損傷,結果表明 SDS-70對雛鴨無致病性,免疫性和安全性良好。攻毒試驗結果顯示SDS-70免疫過的櫻桃谷鴨對強毒SDS-10的攻擊具有100%的臨床保護力。
  對SDS-70弱毒疫苗進行純凈性檢測,包括支原體、細菌和外源病毒的檢測,檢測結果均為陰性,說明該弱毒疫苗純凈。將 S

5、DS-70在鴨體內連續(xù)傳代5次,各代次的試驗鴨均無臨床癥狀,精神良好,剖檢內臟組織器官無病理變化,收集各個代次的病料進行RT-PCR檢測,結果為陽性,表明SDS-70具有良好的穩(wěn)定性,體內傳代后毒力無返強情況。
  對20、40、60、80和100代次的傳代毒株進行全基因組序列分析,與SDS原始毒株全基因組序列相比較,結果20、40、60、80和100代5個代次的傳代病毒株共出現了33堿基突變,包括18個導致氨基酸發(fā)生變化的位點和

6、15個中性突變點。對E蛋白氨基酸序列上的N-連接的潛在糖基化位點進行預測,根據預測結果可以看出,在SDS-80代次時在E基因上出現了一個糖基化位點的缺失,根據氨基酸變化分析可知,該糖基化位點的缺失是由于E蛋白154位上N變?yōu)镠,改變了糖基化位點的固有結構,導致該位點消失。據此推測病毒毒力的改變可能是堿基的突變所導致的。
  綜上所述,SDS-70弱毒疫苗株對櫻桃谷鴨安全性、純凈性與免疫效力較好,并且毒力穩(wěn)定,可以作為TMUV弱毒疫

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