1、該研究以人胃腺癌細胞系作為研究對象,觀察ω-3PUFA對體外培養(yǎng)胃癌細胞和裸鼠人胃癌移植瘤生長的影響以及聯(lián)合5-氟尿嘧啶(5-FU)的腫瘤殺傷效果,并探討其作用機理.第1章ω-3PUFA對人胃癌細胞系增殖與凋亡的影響及聯(lián)合5-FU的細胞殺傷作用.目的:觀察ω-3PUFA對胃癌細胞增殖和凋亡的影響以及與化療藥物5-FU聯(lián)合應用的細胞殺傷效應,并探討其作用機制.方法:人胃腺癌細胞系SGC-790l、MGC-803和人成纖維細胞系HLF常規(guī)培

2、養(yǎng)于含10％新生牛血清、100IU/ml青霉素和100IU/ml鏈霉素的RPMI 1640培養(yǎng)基(pH 7.2)中.以10~40μg/ml的二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)作用于三種細胞12~72小時.采用四甲基偶氮唑藍實驗(MTT分析)、細胞形態(tài)學觀察、片斷DNA凝膠電泳和流式細胞技術分析細胞增殖、細胞周期與凋亡;硫代巴比妥酸法測定細胞內(nèi)脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)的含量;利用熒光探針rhodamine 123測定胃

3、癌細胞線粒體跨膜電位(△ψmt);分離細胞線粒體與胞漿成分,酶聯(lián)免疫吸附實驗分析線粒體和胞漿中細胞色素C的水平;提取細胞線粒體膜磷脂,毛細管氣相色譜法分析線粒體膜磷脂的組成:熒光光譜法測定caspase-3活性;5-FU聯(lián)合20μ∥ml EPA或DHA作用SGC-7901細胞72小時,MTT法分析細胞存活力,計算5-FU的半數(shù)抑制濃度(IC<,50>).結論:ω-3PUFA能選擇性抑制人胃癌細胞系的增殖,誘導胃癌細胞發(fā)生凋亡,這些作用可

4、能是通過ω-3PUFA增加脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物、阻滯細胞周期于G<,0>-G<,1>期、改變線粒體膜構成和功能、隨后開啟線粒體介導細胞內(nèi)在凋亡通路來實現(xiàn)的.此外,ω-3PUFAs可以增強化療藥物5-FU對胃癌細胞的殺傷效應.ω-3PUFAs有望成為一種新的胃癌預防和輔助化療手段.第2章魚油對人胃腺癌裸鼠移植瘤生長的影響及聯(lián)合5-FU化療的實驗研究.目的:初步觀察單用不同劑量魚油和聯(lián)合化療藥物5-FU對人胃腺癌裸鼠移植瘤的治療效果.方法:取0.

5、2ml(2×10<'6>)SGC-7901胃癌細胞懸液注入裸小鼠右側后肢根部皮下,成功建立裸小鼠人胃腺癌皮下移植瘤模型.24只荷瘤裸鼠隨機分為5組:①對照組(4只):0.2ml橄欖油灌胃,每天1次;②低劑量魚油組(5只):0.1ml魚油+0.1ml橄欖油灌胃,每天1次;③高劑量魚油組(5只):0.2ml魚油灌胃,每天1次;④5-FU化療組(5只):30mg/kg體重5-FU腹腔注射,每周3次×4周,0.2ml橄欖油灌胃,每天1次;⑤魚油

6、+5-FU化療組(5只):30mg/kg體重5-FU腹腔注射,每周3次×4周,0.2ml魚油灌胃,每天1次.每4天測量移植瘤的長徑(A)、短徑(B),根據(jù)公式:腫瘤體積(Ⅴ)=0.4×AB<'2>計算腫瘤的近似體積,繪制腫瘤生長曲線.觀察動物的生活狀態(tài)、體重改變及存活情況.實驗結束時,瘤體稱重,取腫瘤組織及化療組小腸、胃、十二指腸、肝臟常規(guī)HE染色,光學顯微鏡下觀察.對照組和化療組進行外周血白細胞計數(shù).結論:高劑量魚油對裸鼠人胃癌移植瘤