1、中藥復方是通過化學成分組合影響到信號分子組合,使紊亂的信號分子網(wǎng)絡恢復平衡,從而達到治療中醫(yī)的證和相關疾病的作用和效果.課題以蛋白質組技術為依托,以基因芯片、RT-PCR和分子雜交等技術為補充建立了一套將化學成分組合與信號分子組合直接相關聯(lián)的技術平臺,考察了復方丹參方、有效單體和單體組合對AS細胞模型和臨床病人血漿的影響,研究目的旨在通過研究初步揭示復方丹參方是哪幾個成分通過哪幾條途徑對AS起治療作用的.實驗建立并完善了蛋白質組學技術平

2、臺,將DIGE技術與硝酸銀和考馬斯亮藍染色的技術相比較發(fā)現(xiàn)三色熒光標記的雙向電泳凝膠具有靈敏度高、準確度高,重復性好的特點.在三種蛋白質的檢測方法中,硝酸銀染色適合確定蛋白質點的有無,考馬斯亮藍R-250染色適合目標蛋白質為高豐度且樣品量大的情況,DIGE技術適合用于差異蛋白質表達譜的分析.考察人參皂苷Rg1作用于TNFα損傷的血管內(nèi)皮細胞的基因和蛋白表達譜,發(fā)現(xiàn)復方丹參方中的人參皂苷Rg1可通過升高血管內(nèi)皮細胞內(nèi)NO的水平,抑制血管內(nèi)

3、皮細胞內(nèi)黏附分子ICAM1,VCAM1,E-selectin的表達,促進纖溶系統(tǒng)中PAI-1的產(chǎn)生,減少生長因子VEGF、bFGF、EGF、TGF-β 1的產(chǎn)生等環(huán)節(jié)減輕TNFα對血管內(nèi)皮細胞的損傷.復方丹參方及其單體組合可以抑制血管平滑肌細胞中G蛋白偶聯(lián)受體、蛋白激酶C、鈣/鈣調(diào)蛋白依賴蛋白激酶,進而減少基質金屬蛋白酶MMP9的表達,同時通過減少氧化、炎癥、基質降解相關蛋白的產(chǎn)生和促進細胞周期相關蛋白p53,p21的表達來減輕TNFα

4、對血管平滑肌細胞的損傷.血漿蛋白質組學的研究結果表明復方丹參方可以降低AS病人血漿中的纖維蛋白原和粒酶.以丹參酮ⅡA和人參皂苷Rg1單體來組方研究發(fā)現(xiàn)單體組方與復方丹參方在蛋白質表達圖譜、差異基因的變化和體外凝血系統(tǒng)的影響方面具有相似性,而丹參酮ⅡA、人參皂苷Rg1與復方丹參方的蛋白質表達圖譜差異較大,用單體來組方的研究結果更接近復方在一定條件下的作用結果.AS發(fā)生發(fā)展的機制為血管內(nèi)皮細胞功能失調(diào)、大量平滑肌細胞增殖與遷移、纖溶減弱、炎