1、目的:糖尿病腎病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病最常見的并發(fā)癥,也是導(dǎo)致慢性腎功能衰竭和糖尿病死亡的重要原因之一,因此防治糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展具有極其重要的意義。腎纖維化和慢性腎功能衰竭是糖尿病腎病的基本病理改變,但糖尿病腎病的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,到目前為止尚未完全明了。近年的研究表明,自身免疫與炎癥是糖尿病腎病的主要發(fā)病機(jī)制之一,這一通路涉及到免疫細(xì)胞的浸潤(rùn)、炎性介質(zhì)的分泌、細(xì)胞因子的產(chǎn)生、細(xì)胞外基質(zhì)的增多和腎臟固

2、有細(xì)胞的損傷等一系列相互關(guān)聯(lián)的過程。
　　 TNF-α誘導(dǎo)蛋白8(TNFAIP8)家族是最近新發(fā)現(xiàn)的一組具有高度同源性序列的蛋白,在維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)和自身免疫調(diào)節(jié)方面具有重要作用,該家族包括TNFAIP8、TIPE1、TIPE2和TIPE3四個(gè)家庭成員。糖尿病腎病的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,有關(guān)TNFAIP8家族在腎臟中的表達(dá)及在糖尿病腎病中的作用,迄今尚未見報(bào)道。因此,本研究課題將對(duì)TNFAIP8家族各個(gè)成員在腎臟中的表達(dá)情況及它們?cè)谔悄虿∧I

3、病發(fā)生發(fā)展過程中可能發(fā)揮的作用進(jìn)行探討。
　　 方法:一、體內(nèi)試驗(yàn):雄性Sprague-Dawley大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組和糖尿病動(dòng)物模型組。通過尾靜脈注射鏈脲佐菌素streptozotocin(STZ,50mg/kg)誘導(dǎo)成模。飼養(yǎng)12周后,進(jìn)行尿白蛋白含量的測(cè)定和HE染色確定腎臟損傷程度、制作腎組織切片用免疫組化檢測(cè)TNFAIP8家族的分布、取腎皮質(zhì),分離和提取RNA和蛋白用實(shí)時(shí)定量RT-PCR,Western blot檢測(cè)TN

4、FAIP8家族表達(dá)的變化、測(cè)定NADPH氧化酶的活性。
　　 二、體外實(shí)驗(yàn):在腎小球系膜細(xì)胞(glomerular mesangial cells,MC)和足細(xì)胞(podocytes,PC)中測(cè)定TNFAIP8家族的表達(dá)和變化以及細(xì)胞的增殖情況。
　　 三、收集糖尿病腎病患者的腎活檢標(biāo)本,通過實(shí)時(shí)定量RT-PCR和免疫組化實(shí)驗(yàn)方法表征TNFAIP8家族成員在腎臟中的表達(dá)和變化。
　　 結(jié)果:在糖尿病大鼠模型中,發(fā)

5、現(xiàn)NADPH氧化酶活性和炎癥因子TNF-α表達(dá)量的增高;通過實(shí)時(shí)定量RT-PCR和Western blot分析,TNFAIP8家族的四個(gè)成員在正常腎臟中均有表達(dá),特別是TNFAIP8和TIPE2在STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠模型的腎皮質(zhì)中表達(dá)量顯著增加,而且這種表達(dá)量的增加在臨床糖尿病腎病病人的腎活檢樣本中也得到了確認(rèn)。在體外實(shí)驗(yàn)中,MC在高糖或TNF-α的刺激下均誘導(dǎo)TNFAIP8的表達(dá),而NADPH氧化酶的抑制劑可以阻斷高糖或TNF-α引

6、起的TNFAIP8的表達(dá)上調(diào)。而這些變化在PC中沒有觀測(cè)到。同時(shí),無(wú)論是MC還是PC在高糖刺激下,均未檢測(cè)到TIPE2表達(dá)量的上調(diào)。
　　 結(jié)論:在TNFAIP8家族的四個(gè)成員中,TNFAIP8和TIPE2在糖尿病大鼠模型與臨床糖尿病腎病病人中的表達(dá)量較正常均增加,提示它們可能參與了DN的發(fā)生發(fā)展;TNFAIP8表達(dá)量的增加與MC在高糖刺激下出現(xiàn)的細(xì)胞增殖現(xiàn)象之間存在直接相關(guān)的關(guān)系;而且,這二者之間的調(diào)節(jié)可能是通過NADPH氧化