1、目的：⑴觀察不同纖維化程度腎穿刺病理標本及AngⅡ誘導的小鼠腎臟病變中細胞外基質及Ets-1表達的變化。⑵觀察AngⅡ刺激體外培養(yǎng)正常大鼠腎間質成纖維細胞株NRK-49F中Ets-1表達及受到siRNA抑制后細胞功能學及細胞外基質的改變，探討Ets-1在AngⅡ致成纖維細胞激活中作用。⑶檢測AngⅡ誘導的腎臟纖維化模型及AngⅡ刺激NRK-49F后miRNA的變化。⑷從microRNA調控水平，對Ets-1作用機制進行深一步探討。

2、>　　方法：以CD1小鼠為研究對象，采用皮下埋置含AngⅡ的滲透性微泵建立慢性腎損傷模型，對照組通過滲透微型泵持續(xù)泵入生理鹽水。以Balb/c小鼠為研究對象，采用尾靜脈注射AngⅡ質粒建立慢性腎損傷模型，對照組尾靜脈注射空質粒。分別于第14、28天收集標本。常規(guī)病理切片觀察腎臟病理，免疫組化及Western blot方法觀察組織中Ets-1、α平滑肌動蛋白(α-SMA)、纖維連接蛋白(FN)的表達。同時以NRK-49F細胞作為實驗對象，

3、用不同濃度AngⅡ刺激NRK-49F及轉染Ets-1 siRNA后，MTT法檢測細胞增殖，Transwell檢測細胞遷移，蛋白免疫印跡、PCR及免疫熒光觀察觀察Ets-1、FN、αt-SMA的表達。探討Ets-1在AngⅡ致成纖維細胞激活中作用。同時qPCR檢測AngⅡ誘導的慢性腎損傷模型及AngⅡ刺激NRK-49F后miR-221的變化。將miR-221前體和抑制物轉染NRK-49F細胞，觀察細胞遷移及Ets-1、FN、α-SMA蛋白

4、表達變化。SigmaStat軟件進行統(tǒng)計分析實驗結果，SigmaPlot軟件表達結果。
　　結果：①皮下埋置含AngⅡ的滲透性微泵及尾靜脈注射AngⅡ質粒均能誘導小鼠腎小管間質纖維化。腎組織FN和α-SMA表達增多。②Ets-1在AngⅡ誘導的慢性腎損傷模型中表達上調。③AngⅡ能激活腎間質成纖維細胞，表現(xiàn)為細胞的增殖、遷移能力增強及FN和α-SMA表達增多，該過程中Ets-1表達上調呈時間及劑量依賴關系。④Ets-1 siRNA

5、可以拮抗AngⅡ對細胞的激活作用。⑤篩選不同時間點AngⅡ刺激腎間質成纖維細胞的microRNA表達變化，其中miR-221呈現(xiàn)持續(xù)性降低趨勢，qPCR驗證在體內及體外實驗中miR-221均表達降低。⑥pre-miR-221使細胞高表達miR221，同時Ets-1蛋白表達降低，拮抗AngⅡ激活腎間質成纖維細胞的作用，anti-pre-miR-221使細胞miR221表達降低，ETs-1蛋白表達增高，加重細胞損害。
　　結論：⑴Et