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文檔簡介
1、葡萄霜霉病是世界上最嚴重的卵菌病害之一,每年都需使用大量化學農藥進行防治。為了避免化學農藥帶來的環(huán)境和健康等諸多方面的問題,篩選出可應用田間的生物防治資源,本研究以葡萄葉提取物與婁地青霉為研究對象,探究不同葡萄葉提取物對葡萄生單軸霉游動孢子釋放、萌發(fā)和游動性的影響;采用顯微觀察和葉片點接法測定巨峰葡萄葉提取物對葡萄生單軸霉孢子囊和游動孢子的抑制作用以及對葡萄霜霉病的防治效果,并應用液質聯用技術對葡萄葉提取物組成成分進行分析;試驗從七種藍
2、紋奶酪中共分離到四株青霉,測定四株青霉的孢子懸浮液和無菌發(fā)酵液對葡萄生單軸霉的抑制作用和對葡萄霜霉病的室內外的防治效果,并對有效菌株進行鑒定。本研究主要結果如下:
不同品種的葡萄葉提取物對葡萄生單軸霉游動孢子均有顯著的抑制作用且新老葉之間差異較小??共∑贩N巨峰葉片提取物在濃度為5 mg/mL時對游動孢子釋放和萌發(fā)的抑制率都能達90%,并能使游動孢子失去游動性;感病品種紅乳葉片提取物在濃度為10 mg/mL以上時才能達到上述效果
3、;感病品種美人指葉片提取物在濃度為5mg/mL時對游動孢子萌發(fā)的抑制率可達90%,在濃度為10 mg/mL時才對游動孢子的釋放和游動性具有強烈的抑制作用。
葡萄葉提取物對葡萄生單軸霉孢子囊和游動孢子的萌發(fā)均有明顯的抑制作用,當使用濃度為10 mg/mL時,葡萄葉提取物對葡萄生單軸霉孢子囊和游動孢子的萌發(fā)抑制率都在85%以上。熒光顯微觀察發(fā)現,葡萄葉提取物可以抑制葡萄生單軸霉在葉片內的擴展,在10 mg/mL濃度下,葡萄葉提取物
4、能顯著抑制孢子囊的形成,其抑制率為82.4%。室內防治試驗顯示,防治效果隨施用濃度的提高而增加,在50 mg/mL濃度下,葡萄葉提取物的防治效果可達100%。在田間防治試驗中,葡萄葉提取物對葡萄霜霉病具有良好的預防效果與化學藥劑不存在顯著差異,發(fā)病后的防治效果達63.2%。經液質聯用技術檢測,葡萄葉提取物成分復雜,共含有33種物質,且主要為芪類化合物,如白藜蘆醇、紫檀芪、蛇葡萄素和葡萄素,其中白藜蘆醇和紫檀芪均表現出對葡萄生單軸霉強烈的
5、抑制效果,紫檀芪的抑制作用強于白藜蘆醇。
菌株P3的孢子懸浮液對葡萄生單軸霉孢子囊萌發(fā)的抑制作用顯著好于其余菌株,萌發(fā)率僅為18%,同時其室內防效達92%。經搖床培養(yǎng)法,四株青霉的無菌發(fā)酵液與對照相比均可顯著抑制孢子囊的萌發(fā),且不存在顯著差異。采用靜置培養(yǎng)法,菌株P2和P3的無菌發(fā)酵液對孢子囊的抑制作用最好,且與搖床培養(yǎng)不存在顯著差異;菌株P1和P4的無菌發(fā)酵液對孢子囊的抑制作用較差。室內防治試驗表明:四株青霉的無菌發(fā)酵液只有
6、菌株P3的發(fā)酵液可完全阻止葡萄霜霉病的發(fā)生,其余菌株發(fā)酵液均有霜霉病發(fā)生,且發(fā)病率均在85%以上與對照不存在顯著差異。田間試驗表明,菌株P3的孢子懸浮液和無菌發(fā)酵液均可預防葡萄霜霉病的發(fā)生并對病害的防治效果達85%以上,與化學藥劑不存在顯著差異。經形態(tài)學和分子鑒定菌株P3為婁地青霉(Penicillium roqueforti)。其無菌發(fā)酵液經乙酸乙酯提取后,經液質聯用分析,初步鑒定其抑菌活性成分含有mycophenolic acid和
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