1、天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文轉(zhuǎn)錄因子Ikaros在肺癌發(fā)生發(fā)展中的功能和調(diào)控姓名：陳娜申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物學(xué)；生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：劉喆201205天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文SKBR3細(xì)胞；運(yùn)用shRNA成功下調(diào)了Ikaros在H69細(xì)胞的表達(dá)；運(yùn)用構(gòu)建質(zhì)粒和細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)成功在A549細(xì)胞中過表達(dá)Ikaros；細(xì)胞的形態(tài)變化：在H69細(xì)胞中下調(diào)Ikaros的表達(dá)豐度之后，細(xì)胞的形態(tài)由原來的懸浮狀態(tài)逐漸變?yōu)橘N壁狀態(tài)；在A549細(xì)

2、胞中上調(diào)Ikaros的表達(dá)豐度后，原來的貼壁細(xì)胞逐漸變得貼壁不緊了；細(xì)胞劃痕試驗(yàn)和Transwell試驗(yàn)結(jié)果：Ikaros的過表達(dá)能夠抑制A549細(xì)胞的遷移能力和侵襲能力；RealTimePCR結(jié)果：檢測(cè)出Ikaros可抑制和細(xì)胞轉(zhuǎn)移和侵襲相關(guān)基因(Nanog、ErbB2、SIPl、TGFcz、ⅡSMA)的表達(dá)；免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果：檢測(cè)到Ikaros在癌旁組織中不表達(dá)，在人的肺癌組織中低分化的腫瘤細(xì)胞中Ikaros的表達(dá)量多于高分化的腫瘤

3、細(xì)胞。2DNA去甲基化是Ikaros在肺癌細(xì)胞中異位表達(dá)的主要調(diào)控機(jī)制利用BLAST軟件對(duì)人和小鼠的Ikaros基因序列進(jìn)行比對(duì)，發(fā)現(xiàn)11個(gè)同源序列，分別為homol，hom02，hom03，hom04，hom05，hom06，hom07，hom08，hom09，homol0和homoll：ChIP實(shí)驗(yàn)結(jié)果：H3K27乙?；虷3K4單甲基化(這兩種修飾是增強(qiáng)子的標(biāo)志)在U937細(xì)胞系中的同源序列hom04、hom05和homoll有富

4、集，而在H1155和A549細(xì)胞中無富集，說明這三個(gè)同源序列是潛在的增強(qiáng)子，而這三個(gè)增強(qiáng)子在H1155細(xì)胞中不具有功能；3C結(jié)果顯示U937細(xì)胞中其啟動(dòng)子區(qū)與其上游的同源序列hom04、hom05和hom011在空間結(jié)構(gòu)上相互接近，H1155細(xì)胞沒有形成這樣的高級(jí)結(jié)構(gòu)，進(jìn)一步證實(shí)hom04、hom05和homoll三個(gè)增強(qiáng)子只在U937細(xì)胞中活躍，在H1155細(xì)胞中盡管Ikaros異位表達(dá)，但增強(qiáng)子不起作用；H3K9乙?；?、H3K4二甲

5、基化和三甲基化在U937細(xì)胞中的啟動(dòng)子區(qū)有明顯的富集，在H1155和A549細(xì)胞中沒有富集，說明組蛋白修飾的改變并非Ikaros異位表達(dá)的因素；Bisulfite—Sequencing實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：在Ikaros表達(dá)的U937，H209，H1155細(xì)胞中的DNA甲基化程度明顯低于Ikaros不表達(dá)的A549，MDAMB231和Beas2B細(xì)胞，說明DNA去甲基化是Ikaros在肺癌細(xì)胞H1155表達(dá)的原因。結(jié)論：Ikaros在肺癌細(xì)胞的