1、化合物知母皂苷B-II是從中藥材知母中提取的含有兩個糖鏈的水溶性甾體皂苷類化合物。前期藥理學研究表明此化合物具有顯著改善多種擬癡呆模型動物的學習記憶功能的作用，在抗老年癡呆方面具有良好前景。為闡明知母皂苷B-II藥代動力學特性，本研究考察了知母皂苷B-II在大鼠體內(nèi)藥代動力學行為，其中包括不同大鼠品系的差異，飽食和禁食的差異等；觀察了知母皂苷B-II在大鼠體內(nèi)組織分布、代謝和排泄的情況，以求為進一步臨床前和臨床研究提供科學依據(jù)。

2、　　 第一部分：大鼠血漿中知母皂苷B-II定量分析方法建立和確證
　　 根據(jù)化合物結(jié)構(gòu)特點和理化性質(zhì)，采用沉淀蛋白結(jié)合液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)建立了一種快速、專屬、靈敏和準確的大鼠血漿中知母皂苷B-II的液質(zhì)聯(lián)用檢測方法（HPLC-MS/MS）。經(jīng)過質(zhì)譜條件和液相條件優(yōu)化，最終確定了采用乙腈沉淀蛋白后，以重樓皂苷I為內(nèi)標物﹙Internal Standard，IS﹚，色譜柱為GRACE公司Alltima HP C18柱（2.1×50 mm

3、，5μm）。分析流動相為乙腈 ：1 mmol/L乙酸銨溶液（30 ：70，v ：v），流速0.2 ml/min，柱溫 ：室溫。檢測方式為負離子多反應監(jiān)測（MRM），采用氣動輔助電噴霧離子化(ESI)方式電離。方法學驗證參考FDA關(guān)于分析方法驗證指導原則和SFDA對用于藥代動力學研究方法學的要求，考察了精密度和準確度、基質(zhì)效應、回收率、稀釋線性和穩(wěn)定性(4°C進樣盤中12 h的穩(wěn)定性、反復凍融和長期穩(wěn)定性)等參數(shù)。結(jié)果表明：知母皂苷B-I

4、I在大鼠血漿中的標準曲線線性范圍為5-2000 ng/mL，最低定量下限(LLOQ)為5ng/mL。質(zhì)控樣品的高、中、低三種濃度日內(nèi)和日間精密度均<10.3％，準確度為-3.7％-7.5％。知母皂苷B-II在大鼠血漿中不存在明顯的基質(zhì)效應，乙腈沉淀蛋白方法的知母皂苷B-II提取回收率高、中、低濃度分別為91％，112％，107％。方法學驗證的結(jié)果表明采用此方法測定的藥物濃度準確、可靠，其測定誤差滿足藥代動力學研究方法學的要求限度。

5、>　　 第二部分：SD大鼠單次ig 不同劑量知母皂苷B-II后藥代動力學性質(zhì)
　　 研究了單次灌胃給予不同劑量（20，40，80 mg/kg）知母皂苷B-II后血漿中藥物濃度-時間變化。結(jié)果表明知母皂苷B-II在大鼠體內(nèi)的血藥濃度個體差異大，個體達峰時間（Tmax）及峰濃度（Cmax）變異很大，提示藥物的吸收很不規(guī)則。各組內(nèi)多數(shù)大鼠血藥濃度于給藥后5～30 min達峰，提示知母皂苷B-II灌胃后迅速吸收，胃及消化道上段可能是其

6、有效吸收部位。各劑量組AUC(0-t)比值（1：1.4：2.6）與劑量之比（1:2:4）不呈線性。隨劑量增高，藥時曲線雙峰現(xiàn)象呈明顯趨勢，導致雙峰現(xiàn)象的原因可能為腸肝循環(huán)和/或胃腸消化道的不均一吸收。SD大鼠iv 20 mg/kg 知母皂苷B-II后，血藥濃度于給藥后的第一個觀測點5min達峰，峰濃度為185833.3 ng/mL，隨后血藥濃度隨時間顯著下降，給藥1.5h后絕大多數(shù)血藥濃度已降至峰濃度的1/100或以下，以20 mg·k

7、g-1 iv給藥組的歸一化AUC(0-t)為分母，大鼠80 mg/kg ig給藥組的絕對生物利用度僅為0.11±0.09％。
　　 第三部分：Wistar大鼠單次ig 不同劑量知母皂苷B-II后藥代動力學性質(zhì)
　　 由于知母皂苷B-II在SD 大鼠體內(nèi)藥代動力學行為表現(xiàn)個體差異大，因此選擇另一品系嚙齒類動物Wistar大鼠研究知母皂苷B-II在其體內(nèi)藥代動力學性質(zhì)。結(jié)果表明知母皂苷B-II在Wistar大鼠和SD大鼠體內(nèi)

8、藥代動力學行為相似，均表現(xiàn)為個體差異大，吸收不規(guī)則，生物利用度低的特點。
　　 第四部分：比較SD大鼠在飽食和禁食兩種狀態(tài)下藥代動力學行為差異
　　 由于在禁食條件下，知母皂苷B-II在大鼠體內(nèi)口服表現(xiàn)吸收不規(guī)則、個體差異大，生物利用度低等特點，同時大量藥理研究表明食物對藥物的吸收產(chǎn)生促進、抑制甚至產(chǎn)生嚴重的不良反應。為評價食物對知母皂苷B-II PK的影響，本部分探討了禁食和飽食狀態(tài)下知母皂苷B-II在SD大鼠體內(nèi)的藥

9、動學性質(zhì)。結(jié)果表明大鼠在飽食和禁食兩種狀態(tài)下均觀察到雙峰現(xiàn)象，與禁食口服給藥后的藥時曲線相似。飽食組第一吸收峰顯著高于空腹組，且由于食物的存在使吸收更加不規(guī)則。相同劑量相同給藥途徑下，大鼠的飽食組和空腹組AUC(0-t)分別為221.05±157.75和201.81±178.70 ng·h/mL，兩者無統(tǒng)計意義差別，但均值上飽食組較禁食組增加約10％，結(jié)果表明食糜的存在使知母皂苷B-II的吸收增加，但也會使藥物吸收更加不規(guī)律。
　

10、　 第五部分：研究了SD大鼠灌胃給予知母皂苷B-II后組織分布，膽汁和糞尿排泄
　　 大鼠灌胃給予40mg/kg知母皂苷B-II后，選擇給藥后30 min，2 hr和8 hr (涵蓋吸收相、分布相和消除相) 三個時間點分別處死大鼠，取大腦、小腦和腦干、心、肝、脾、肺、腎、胃、胃內(nèi)容、十二指腸及其腸內(nèi)容、直腸腸內(nèi)糞、腦、骨骼肌、脂肪、生殖腺和體液等19種組織或器官，測定知母皂苷B-II在這些組織或器官的濃度。排泄研究觀察了大鼠給

11、予80 mg/kg知母皂苷B-II后至96 h的糞尿排泄情況及給藥后至24 h的膽汁排泄情況。結(jié)果表明：灌胃40 mg/kg知母皂苷B-II水溶液后，其在組織中的暴露水平由低到高依次為：小腦、腎、腦干、大腦、脾、肺、心臟、生殖腺、肌肉、肝、血漿、脂肪、腸內(nèi)糞、腸內(nèi)容、尿、小腸、胃和胃內(nèi)容，提示化合物知母皂苷B-II主要分布在消化道（如：胃、腸和消化道內(nèi)容物）。藥物在大腦、小腦和腦干中也有少量分布，且沒有時相變化。在大多數(shù)組織中，知母皂苷

12、B-II濃度在0.5h達到高峰，提示藥物在組織中有很快的分布速度。灌胃80 mg/kg知母皂苷B-II水溶液后，24小時內(nèi)藥物經(jīng)膽汁排泄累積率是2.54±1.59％，96小時內(nèi)在糞和尿中知母皂苷B-II累積排泄率是0.0188±0.0090％，96小時內(nèi)在尿和糞累積排泄率分別是0.0144±0.0082％，其中糞只在6-12 h檢測到微量原形物，在24 h后基本檢測不到原形。結(jié)合分布實驗驗結(jié)果，推測知母皂苷B-II物主要以代謝物形式排泄