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文檔簡介
1、目的:探討二十二碳六烯酸(DHA)對胃癌MGC803細胞生長增殖的作用及作用機制,為開發(fā)新的抗腫瘤藥物提供實驗依據(jù)。
方法:
1.體外培養(yǎng)胃癌MGC803細胞,分別采用1、10、30、60、100uMol/L濃度的DHA作用胃癌細胞MGC-80324h后,MTT法觀察細胞生長增殖抑制情況。
2.制備細胞爬片,免疫細胞化學(xué)染色,經(jīng)60uMol/L濃度的DHA處理MGC-803細胞24h后,觀察細胞β-cate
2、nin表達及分布情況;
3.60uMol/L濃度的DHA分別作用MGC-803細胞0.5h、1h、3h、6h, Western Blotting技術(shù)檢測細胞GSK-3β、β-catenin、P-GSK-3β蛋白表達情況,另外選用GSK-3β活性抑制劑Licl處理后,用60uMol/L濃度的DHA處理MGC-803細胞24h,觀察細胞中β-catenin蛋白的表達。
結(jié)果:
1.MTT法測定結(jié)果顯示:DHA濃
3、度由1uMol/L增加到100uMol/L MGC-803細胞的生長抑制率由8%提升到64.25%,呈濃度-效應(yīng)依賴關(guān)系,并計算出 DHA抑制MGC-803細胞增殖的IC50值在60uMol/L。各濃度組與對照組之間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義, P<0.05。
2.免疫細胞化學(xué)檢測結(jié)果顯示:經(jīng) DHA處理 MGC-803胃癌細胞后,β-catenin蛋白主要分布于胞膜和胞質(zhì),β-catenin蛋白總量減少了22.43±0.66%,P<
4、0.05,各組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
3.Western Blotting結(jié)果顯示:60uMol/L DHA分1/2,1,3,6h時間段處理MGC-803細胞后,β-catenin蛋白總量逐漸減少; GSK-3β蛋白總量逐漸增多,P-GSK-3β蛋白總量逐漸減少。經(jīng) Licl處理后DHA作用24h組MGC-803細胞β-catenin蛋白總量較對照組減少32.19±2.32%,單用DHA處理24h組β-Catenin表達較對照
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