1、背景:茶是世界上最受歡迎的飲料之一,并且茶能在多個方面促進健康,這是兩千多年以來已經(jīng)眾所周知的。每日飲茶可以降低膽固醇,減少心臟病發(fā)生的幾率,可以提高免疫力,能有益人體皮膚等等。在人類群體中,喝茶尤其可以降低各種類型癌癥的風險,包括胃癌、直腸癌、胰腺癌等。事實上,來自于EGCG的抗氧化性能和螯合金屬物的功能可能有助于茶葉抵抗腫瘤的發(fā)生。EGCG在茶多酚混合物的比例占40％左右,因此在茶的預防腫瘤效果中起著非常重要的作用。此外,有大量證據(jù)

2、也表明, EGCG通過調節(jié)細胞內信號傳導網(wǎng)絡,具有抗癌的性質。
　　Stats蛋白質家族由七種蛋白構成,而Stat3就是其中之一。Stat3具有調節(jié)許多細胞和生長因子的功能。它在許多不同類型的癌癥中都表現(xiàn)出過度激活的狀態(tài),如乳腺癌、前列腺癌、頭頸部腫瘤、肺癌、結腸癌、肝癌和胰腺腫瘤、淋巴細胞性白血病、多發(fā)性骨髓瘤等等。此外,通過人類腫瘤異種移植小鼠成瘤的多次研究表明,抑制腫瘤細胞中STAT3信號傳導通路的異常表達將會降低腫瘤的生長

3、繁殖、誘導細胞凋亡、抑制血管新生、增強抗腫瘤免疫調節(jié)的細胞毒性,提高動物生存力。因此,在治療多種類型的癌癥中,STAT3已被認為是一個潛在的腫瘤藥物作用分子靶標。
　　目的:探討EGCG通過抑制STAT3信號通路對抗腫瘤細胞的分子機制.
　　方法:本次研究方法共分為兩個部分。
　　第一部分: 在這個研究中,我們通過表面等離子體共振結合實驗(SPR)及分子模擬對接實驗探尋EGCG抑制STAT3信號傳導通路的機制。

4、　　第二部分：通過應用EGCG干預體外培養(yǎng)的腫瘤細胞,①用MTT法檢測腫瘤細胞的生長抑制情況,分析藥物濃度和細胞增殖抑制率之間的關系;②用流式細胞儀檢測不同濃度的藥物對腫瘤細胞凋亡的影響;③用蛋白免疫印跡技術和基于細胞的酶聯(lián)免疫吸附實驗監(jiān)測藥物濃度的改變對腫瘤細胞表達總Stat3蛋白和磷酸化Stat3蛋白水平的影響;④用半定量PCR法研究藥物對細胞STAT3信號傳導通路下游基因Bcl-xl、c-myc、VEGF、cyclinD1 mRN

5、A的表達水平的影響。
　　結果:基于我們在對BIAcore分子相互作用實驗的研究,EGCG抑制了Stat3蛋白與磷酸化配體的結合。此外,通過分子模擬對接實驗分析,我們發(fā)現(xiàn)EGCG分子與位于Stat3 SH2區(qū)的兩項關鍵的殘留r-609和 k-591有著緊密的相互作用。EGCG通過抑制STAT3信號傳導通路對腫瘤細胞生物學行為的影響的實驗研究發(fā)現(xiàn):不同濃度的EGCG作用于肝癌Bel-7402和QGY-7703細胞48小時后,細胞增值

6、抑制率呈現(xiàn)上升趨勢。濃度越大,增殖抑制率越明顯,并呈濃度效應關系(P<0.05)。②流式細胞儀檢測到EGCG干預后48小時的肝癌細胞,細胞凋亡的百分比隨著藥物濃度的增加而增加,并呈濃度效應關系(P<0.05)。③蛋白免疫印跡及基于細胞的酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測Stat3蛋白和磷酸化Stat3蛋白顯示:肝癌細胞QGY-7704中Stat3蛋白的表達不隨EGCG濃度的增加而改變,但磷酸化Stat3蛋白的表達隨EGCG濃度的增加表達量降低,呈劑量

7、依賴性(P<0.05)。而且,在EGCG濃度為40μM對p-Stat3的抑制與AG-490濃度為50μM有相同效果。④半定量PCR檢測STAT3下游Bcl-xl、c-myc、VEGF、cyclinD1 mRNA表達量較陰性對照組明顯減少(P<0.05),呈濃度效應關系。
　　結論:本次研究數(shù)據(jù)提示沒食子兒茶素沒食子酸酯抑制STAT3信號轉導通路是綠茶抗癌功能的一個重要原因。EGCG作為STAT3信號轉導通路的抑制劑可以與Stat3