1、小膠質細胞乳鐵蛋白的表達及其對腹側中腦神經(jīng)元的作用研究摘要帕金森病(Parkinson’Sdisease，PD)是一種常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，l臨床表現(xiàn)主要有靜止性震顫、肌僵直、運動減少和姿勢反射障礙等癥狀。PD的神經(jīng)病理學基礎是黑質致密帶(substantianigraparscompacta，SNpc)多巴胺(dopamine，DA)能神經(jīng)元的變性脫失以及由此而導致的紋狀體DA含量降低。PD的病因目前尚未完全明了，與遺傳因素、

2、環(huán)境因素、氧化應激、興奮性毒素、自身免疫、黑質(substantianigra，SN)鐵聚積和細胞凋亡等多種因素有關。PD患者的中腦SNpc有大量的激活的小膠質細胞，這些激活的小膠質細胞和殘存的DA能神經(jīng)元又有大量的鐵沉積，然而小膠質細胞激活和鐵聚積之間的關系尚未闡明。乳鐵蛋白(1actoferrin，Lf)是一種鐵結合性糖蛋白，屬于轉鐵蛋白家族成員之一，由許多外分泌腺分泌，存在于人類和其他哺乳動物的淚液、唾液、乳汁和嗜中性粒細胞中。乳

3、鐵蛋白受體(1actoferrinreceptor，LfR)廣泛存在于人體內的不同組織和細胞類型中，其作用是通過受體介導的內吞參與Lf內化。Lf可以結合轉運三價鐵離子，是鐵在機體內代謝及轉運的關鍵載體。Lf還具有廣泛的生物學功能：抗氧化應激，抗癌，調控免疫炎癥反應等，可能與其鐵結合特性無關。在體內Lf主要以兩種形式存在：不含鐵形式(apo1actoferrin，apoLf)和鐵飽和形式(holo—lactoferrin，holoLf)。

4、在腦內只有激活的小膠質細胞合成釋放LC1甲基_4一苯基1，2，3，6一四氫吡啶(1methyl4phenyll，2，3，6tetrahydropyridine，MPTP)模型小鼠中LfmRNA的表達水平升高。LfR主要在神經(jīng)元上表達，腦組織染色發(fā)現(xiàn)PD患者中腦的神經(jīng)元和微血管中LfR反應性表達增加，提示Lf／LfR與PD鐵聚積和神經(jīng)元進行性退化之間有一定關聯(lián)性。本研究應用原代培養(yǎng)的大鼠小膠質細胞、腹側中腦神經(jīng)元及神經(jīng)毒素MPTP制各的P

5、D小鼠模型，采用酶聯(lián)免疫吸附實驗、實時熒光定量PCR、流式細胞儀技術、免疫熒光、免疫印跡、高效液相色譜法、激光共聚焦掃描技術等多項研究方法，探討了鐵對激活的小膠質細胞合成釋放Lf的影響以及Lf對神經(jīng)毒素1一甲基4苯基吡啶陽離子(1methyl4一phenylpyridiniumion，Mpp)損傷的腹側中腦神經(jīng)元及MPTP誘導的PD模型小鼠發(fā)揮保護作用的可能機制。結果如下：1100Imaol／LMPP或800ng／ml的脂多糖(1ipo

6、polysaccharide，LPS)處理原代培養(yǎng)的小膠質細胞24h，Lf的釋放量顯著增]JI(P005)。100pmol／L的枸櫞酸鐵銨(ferricammoniumcitrate，F(xiàn)AC)預處理12h可顯著增加其釋放量，差別有統(tǒng)計學意義(P005)。lllillllllllllllllllllllMlllllnfY2589033物DOPAC、HVA的含量明顯降低，而經(jīng)Lf預處理以后可明顯拮抗上述變化。本實驗通過研究Lf合成釋放的影響