1、由于綠原酸對許多疾病都具有明顯的療效，日益受到醫(yī)學及藥學界的重視，社會需求巨大，但目前國內綠原酸的相關研究尚非常薄弱，尚無成熟的綠原酸純品生產工藝。本研究的主要目的是為了建立穩(wěn)定有效的金銀花綠原酸提取純化物的檢測鑒定方法；明確綠原酸的化學穩(wěn)定性為其生產和儲存工藝提供參考；通過工藝優(yōu)化尋找更經濟高效的綠原酸提取及分離純化方法；通過對幾種食品中常見致病菌的綠原酸抑制活性研究，進一步明確綠原酸的抑菌活性，完善綠原酸的抗菌譜。研究結果如下：

2、r>　　綠原酸鑒定檢測方面：硅膠薄層層析經紫外成相分析得知，乙酸乙酯:水:乙酸(v/v,10:3:2)為流動相配比，保留因子值達到0.68；由紫外可見光光度儀在400 nm-200 nm波長掃描得知綠原酸在紫外327 nm波長處有最大吸收，以濃度C（x軸）對吸光度 A(y軸)作圖繪制 UV標準曲線，標準曲線回歸方程：y=0.0553x-0.0034，R=0.9996；0～15μg/ml線性關系良好；經實驗優(yōu)化，高效液相分析參數為：色譜柱

3、ZOBAX SB(150 mm×4.6 mm,5μm)；流動相為甲醇:水:乙酸(18:81:1)，流速:1 mL/min，檢測波長:327 nm，柱溫:30℃，進樣量:20μL；此條件下，樣品中綠原酸與相鄰成分基線分離，以濃度C（x軸）對峰面積V（y軸）作圖，得到標準曲線回歸方程為：y=51813 x-5832，R=0.9991，0～13μg/ml范圍內線性關系良好；采用外標法確認提取的綠原酸的保留時間為8.832 min；同法測得原料

4、金銀花綠原酸含量為3.3％（n=3，RSD=2.0%），回收率98%；而原料金銀花浸膏的綠原酸含量為10.15%（n=3,RSD=1.8%）。
　　綠原酸的穩(wěn)定性實驗表明：相同存儲條件下，綠原酸在pH3.0時比pH5.6時更穩(wěn)定；而同樣溶劑條件下，綠原酸于4℃恒溫冰箱避光放置時比其25℃恒溫儲藏室自然光放置更穩(wěn)定，儲存30天后，經單因素Duncan多重函數檢驗比較得出二組實驗數據在置信區(qū)間5%水平上均表現(xiàn)為顯著差異。
　　本

5、文通過對醇回流法、超聲波提取法、微波輔助提取法等方法的考察發(fā)現(xiàn)微波-超聲波聯(lián)合提取法的綠原酸提取率最高，且提取綠原酸的提取率比目前最普遍采用的70%乙醇回流法的提取率71.15%高20%以上，遠高于單獨的超聲法或微波輔助提取法50%的水平。綠原酸經微波破壁后繼續(xù)使用20Hz的低頻率超聲波溫和提取，2次重復綠原酸的提取率即達到了92.66%；微波-超聲波聯(lián)合提取法正交實驗得出其最佳工藝參數為：在250 W功率下微波預處理3次，30 s/次

6、；按料液比（v/v,1/20）加入70%乙醇，在功率18 W下超聲提取20 min，一次性提取率即達73%以上；各因素的影響從大到小為：超聲功率＞溶劑倍量＞超聲時間。
　　以重慶金銀花浸膏為原料，以綠原酸提取率為指標，采用紫外光譜法、高效液相法定性定量，著重研究比較了金屬離子沉淀法與柱層析（比較聚酰胺、大孔樹酯D101、硅膠G三種填料），結果表明，三種預分離方法中聚酰胺柱層析分離獲得的綠原酸純度最高，綠原酸的純度從15％一次性提高

7、至45.2%，增幅達30%，此時綠原酸的回收率達到81.6%；硅膠G柱層析法的產物得率最高，達到60.6%，但產物中綠原酸含量最低，僅為18.8%；D101大孔樹脂法產物中綠原酸的含量與Zn離子沉淀法相當，達到31%，但是Zn離子沉淀法綠原酸回收率相對較低，僅為50.0%。綜合考慮綠原酸回收率及綠原酸純度兩個關鍵因素，最終確定聚酰胺柱層析為綠原酸的初步純化方法。將聚酰胺柱層析的純化物，進行乙酸乙酯萃取，萃取4次即基本萃取完全，濃縮結晶后

8、，經HPLC測定，純度達到92%，綠原酸平均回收率為88.4%（RSD＝2.15%）；從將浸膏進行聚酰胺柱層析到乙酸乙酯萃取完全的絕對回收率達到72.1%（81.6%×88.4%＝72.1%）。
　　本文分別選取兩種革蘭氏陰性菌（志賀氏菌、沙門氏菌）和革蘭氏陽性菌（金黃色葡萄球菌和李斯特菌）進行綠原酸抑菌活性研究，實驗結果表明，綠原酸對革蘭氏陰性菌的抑菌活性比革蘭氏陽性菌更強，綠原酸水溶液對志賀氏菌、沙門氏菌的最小抑菌濃度均為0.