1、授予單位代碼學(xué)號(hào)或申請(qǐng)?zhí)柮芗?jí)10459200612046100210004_公開(kāi)文學(xué)論大位州學(xué)鄭士碩(科學(xué)學(xué)位)CxcR4、SDF1和vEGF在小兒腎母細(xì)胞瘤中的表達(dá)及意義院系名稱:鄭州大學(xué)第三臨床學(xué)院學(xué)科門類:醫(yī)學(xué)專業(yè)名稱:外科學(xué)作者姓名:董正華導(dǎo)師姓名、職稱:張書峰教授二零零九年五月鄭州大學(xué)20()9年碩士畢業(yè)論文CXCR4、SDF1和VEGF在小兒腎母細(xì)胞瘤中的表達(dá)及意義實(shí)驗(yàn)方法1.實(shí)驗(yàn)對(duì)象選擇、組織樣本的采集和患者臨床資料的整理

2、選取2007年一2008年間鄭大三附院，鄭大一附院，手術(shù)切除的腎母細(xì)胞瘤30例(其中新鮮標(biāo)本19例蠟塊n例)和瘤旁組織12例(距腫瘤大于SCM)分別為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，搜集患者的性別，臨床分期，病理類型，有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等方面的臨床資料，便于統(tǒng)計(jì)分析和研究。2.采用Tri201試劑提取腎母細(xì)胞瘤組織RNA。通過(guò)1.0%的瓊脂糖凝膠電泳及RNA的OD值評(píng)估RNA的含量和純度。3.使用Promega公司的AMV逆轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行cDNA的逆轉(zhuǎn)錄。

3、RT一PCR擴(kuò)增p一actin的檢測(cè)逆轉(zhuǎn)錄效果。4.設(shè)計(jì)兩者引物，對(duì)CXCR4基因在腎母細(xì)胞瘤及瘤旁正常組織中表達(dá)量進(jìn)行檢測(cè)，CXCR4的相對(duì)含量=(CXCR4密度p一aetin密度)。5.免疫組化方法檢測(cè)CXCR4、SDF一1和VEGF三種蛋白的表達(dá)情況。陽(yáng)性細(xì)胞胞質(zhì)著色，按染色強(qiáng)度分別進(jìn)行計(jì)分。計(jì)算機(jī)輔助圖像分析求其光密度(0D)值平均值，代表其蛋白的含量。6.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析運(yùn)用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件，采用x’檢驗(yàn)，F(xiàn)isher精確檢

4、驗(yàn)和獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)等方法對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。以只0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.RT一PCR結(jié)果顯示腫瘤組織中CXCR4mRNA的相對(duì)含量高于瘤旁組織(只0.05)。CXCR4mRNA相對(duì)含量在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)組高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，臨床分期m一W組高于I一11期組，預(yù)后不良組CXCR4mRNA相對(duì)含量高于預(yù)后良好組。免疫組化檢測(cè)CxCR4蛋白結(jié)果和PCR結(jié)果吻合，呈現(xiàn)一致的變化趨勢(shì)。2.腎母細(xì)胞瘤中SDF一1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率是53.