1、目的:本課題研究目的是在前人的研究基礎(chǔ)之上,收集脂溢性角化病和色素痣的臨床標(biāo)本,提取總DNA,應(yīng)用HPV特異型和通用型引物對(duì)進(jìn)行擴(kuò)增,檢測(cè)標(biāo)本中某些型別HPV DNA的存在與否,制作石蠟切片,應(yīng)用兩種針對(duì)HPV L1蛋白的抗體進(jìn)行免疫熒光試驗(yàn),檢測(cè)標(biāo)本中HPV L1蛋白的存在與否,從基因和蛋白兩個(gè)水平研究脂溢性角化病和色素痣皮損中HPV的存在情況,及其存在與病損的發(fā)生有無相關(guān)性。
　　方法:(1)收集脂溢性角化病和色素痣石蠟標(biāo)本,

2、確定其臨床診斷和病理診斷,將同一標(biāo)本分成兩部分,一部分以4um厚連續(xù)切片,撈片,另外一部分以10um厚連續(xù)切片,5片,裝入1.5ml的EP管中;(2)對(duì)所有標(biāo)本提取總DNA,采用PCR方法檢測(cè)HPV病毒基因的存在與否,確定HPV DNA陽(yáng)性檢出率;(3)對(duì)相同的所有標(biāo)本以本課題組所制備的兔抗HPV L1多克隆抗體及購(gòu)買的小鼠抗HPV L1單克隆抗體為一抗進(jìn)行免疫熒光檢查,檢測(cè)組織中HPV L1蛋白的存在情況及陽(yáng)性檢出率;(4)采用統(tǒng)計(jì)學(xué)

3、軟件,綜合分析以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果,確證脂溢性角化病和色素痣中HPV的存在情況,探討HPV在上述疾病發(fā)病機(jī)制中所發(fā)揮的作用。
　　結(jié)果:(1)共收集脂溢性角化病石蠟標(biāo)本46例,色素痣52例;(2)PCR中,對(duì)所有標(biāo)本提取總DNA后均進(jìn)行β-globin基因擴(kuò)增,脂溢性角化病陽(yáng)性者38例,色素痣陽(yáng)性者44例,對(duì)所有β-globin基因擴(kuò)增陽(yáng)性的標(biāo)本進(jìn)行HPV16 E6,HPV18 E6擴(kuò)增后再進(jìn)行HPV L1通用型引物對(duì)MY09/11,GP

4、5+/6+擴(kuò)增,每個(gè)引物擴(kuò)增重復(fù)兩遍,結(jié)果38例SK中有一例HPV16 DNA弱陽(yáng)性,檢出率為2.63％,其余標(biāo)本全部為陰性;(3)脂溢性角化病標(biāo)本進(jìn)行免疫熒光檢測(cè),兔抗HPV L1多克隆抗體為一抗時(shí),陽(yáng)性部位主要在上皮未角化部,陽(yáng)性者共24例,HPV LI蛋白檢出率為63.16％,鼠抗HPV L1單克隆抗體為一抗時(shí),陽(yáng)性主要表達(dá)在上皮角化層及真皮角化珠內(nèi),陽(yáng)性者共20例,HPV LI蛋白檢出率為52.63％。色素痣標(biāo)本進(jìn)行免疫熒光檢測(cè)

5、,兔抗HPV L1多克隆抗體為一抗時(shí),陽(yáng)性主要表達(dá)在上皮未角化部及汗腺內(nèi),陽(yáng)性者共22例,HPV LI蛋白檢出率為50.00％,鼠抗HPV L1單克隆抗體為一抗時(shí),陽(yáng)性主要表達(dá)在上皮角化層及毛囊內(nèi),陽(yáng)性者共20例,HPV LI蛋白檢出率為45.45％;(4)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示,脂溢性角化病和色素痣標(biāo)本中HPV DNA檢出率與HPV L1蛋白檢出率的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:(1)本實(shí)驗(yàn)中脂溢性角化病標(biāo)本中除HPV16外其他的HPV

6、 DNA的檢出率為零,由于HPVL1通用型引物MY09/11,GP5+/6+擴(kuò)增型別是有限的,是否有其他型別HPV DNA的存在需要進(jìn)一步證實(shí),但是HPV LI蛋白的檢出率較高,分析得出HPV尤其是高危型與其發(fā)病機(jī)制不相關(guān),某些皮膚型HPV可能在組織中存在。(2)色素痣石蠟標(biāo)本中基因和蛋白水平的檢測(cè),得出的結(jié)論與脂溢性角化病相似。(3)兩種HPV LI抗體的陽(yáng)性表達(dá)部位的不同,提示抗體的差異,同時(shí)顯示皮膚標(biāo)本中角化層與未角化層均存在HP