1、肝臟疾病嚴重影響人類健康，并對社會經濟發(fā)展產生巨大影響。肝癌是世界上死亡率最高的惡性腫瘤之一，病毒性肝炎、肝纖維化、肝硬化等都是肝癌主要的致病原。因此肝病的診斷就成為醫(yī)學診斷學的重要組成部分。人類肝臟F蛋白是一種新型的尚未應用于臨床的直接反映肝損傷程度的生物學標志之一。從80年代開始，人們開始研究血清F蛋白含量與肝損傷程度的關系，獲得了一些臨床數(shù)據(jù)。肝細胞中的F蛋白濃度與血清F蛋白的濃度之間存在的巨大差異以及F蛋白的嚴格的組織特異性，使

2、其成為一種非常有希望的反映肝細胞損傷程度的靈敏和特異的指標。目前，肝臟特異性F蛋白的研究與臨床應用受到越來越多的關注。 本文在前人研究的工作基礎上，從新鮮人肝臟組織提取肝臟總mRNA，確定其純度和完整性后對其進行反轉錄(RT-PCR)和PCR，擴增出目的基因，然后將其與pUCm-T載體進行連接獲得克隆質粒pUCm-T-F并轉化到大腸桿菌DH5α中；將測序結果正確的克隆片斷與表達載體pET-15b連接，獲得F蛋白的表達質粒pET1

3、5b-F并將其轉化到表達菌株BL21(DE3)pLysS中，用IPTG誘導其表達，表達后通過親和層析柱(Ni<'2+>-charged IDA His-bind column)純化，用十二烷基硫酸鈉-聚丙稀酰胺凝膠電泳與免疫印跡(Western blot)對其進行檢測。以此蛋白為抗原免疫兔子制備兔抗人F蛋白多克隆抗體，用間接ELISA法測定其抗體的效價，用免疫印跡檢測其特異性。 人F蛋白的基因克隆結果顯示目的基因大小為1200b

4、p左右，與預期值相符。表達后的全菌蛋白進行SDS-PAGE電泳檢測，目的條帶分子量大小約為43kD，與文獻報導一致。Western-blot顯示純化后的F蛋白與豚鼠抗人提純F蛋白多克隆抗血清反應為陽性，說明我們經基因工程方法得到的純化的F蛋白具有免疫活性。間接ELISA法測定抗體的效價，結果顯示其效價可達1:6400，可用于免疫反應；Western-blot顯示制備的抗體與提純的人肝臟特異性F蛋白發(fā)生了反應，表明我們制備的抗體具有免疫特

5、異性，可用于后續(xù)的實驗研究。 肝臟特異性F蛋白是反映肝損傷的一種靈敏、有效而又穩(wěn)定的指標，同時F抗原在肝病早期診斷與治療、藥物的篩選與療效觀察、治愈狀況、肝損傷程度的判斷等方面以及法醫(yī)學方面、免疫耐受肝移植抗排斥方面的研究都具有重要的應用價值。用化學提純的方法很難得到大量F抗原，這就阻礙了其他研究的進行。因此，本文采用基因工程方法得到人肝臟F抗原的基因克隆，并誘導表達人肝臟F蛋白，解決了其來源問題。同時以此基因工程蛋白為抗原制備