1、本文在實(shí)驗(yàn)室前期工作基礎(chǔ)上，進(jìn)行了兩種棉鈴蟲(chóng)功能基因重組病毒殺蟲(chóng)劑的實(shí)驗(yàn)研究，為篩選新的重組病毒候選基因提供實(shí)驗(yàn)證據(jù)。論文還探索建立了三種體外連續(xù)傳代的棉鈴蟲(chóng)細(xì)胞系，為進(jìn)一步在體外研究棉鈴蟲(chóng)活體細(xì)胞的激素調(diào)控、病毒感染、細(xì)胞凋亡等分子生物學(xué)機(jī)制奠定了基礎(chǔ)?，F(xiàn)將論文內(nèi)容概括如下： 第一部分：棉鈴蟲(chóng)功能基因重組病毒殺蟲(chóng)劑研究。桿狀病毒中絕大部分是昆蟲(chóng)特異性病原，因不感染脊椎動(dòng)物，是理想的控制害蟲(chóng)的生物“工具”。然而根據(jù)研究得知，野生

2、型桿狀病毒具有殺蟲(chóng)譜窄，殺蟲(chóng)速度慢的缺點(diǎn)。遺傳改造病毒，選用外源基因構(gòu)建重組病毒，使重組病毒感染蟲(chóng)體后除了病毒的毒殺作用外還通過(guò)外源基因的持續(xù)表達(dá)雙重干擾昆蟲(chóng)，以加快害蟲(chóng)的死亡、提高害蟲(chóng)的死亡率，大大減少農(nóng)林業(yè)的經(jīng)濟(jì)損失。已報(bào)道了多種基因重組病毒，如蝎毒素、螨毒素、利尿激素、保幼激素酯酶等基因的重組病毒，其殺蟲(chóng)效果雖都優(yōu)于相應(yīng)的野生型病毒，但仍不理想。新的安全高效的基因重組病毒候選基因需要探索和發(fā)現(xiàn)。 第二部分：棉鈴蟲(chóng)表皮、精巢

3、、卵巢細(xì)胞系的建立。探索建立了棉鈴蟲(chóng)表皮、精巢、卵巢三種組織的新細(xì)胞系，依次命名為SDU-Ha-Epi，SDU-Ha-Spe，SDU-Ha-Ova。已分批在-196℃冷凍保存。對(duì)表皮和精巢細(xì)胞系分別進(jìn)行了細(xì)胞生長(zhǎng)曲線、群體細(xì)胞倍增時(shí)間、染色體，酯酶同工酶以及病毒敏感性檢測(cè)等。表皮和精巢細(xì)胞系各有多種細(xì)胞類型，表皮細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)期在第4～11d，精巢細(xì)胞系在第3～9d，表皮細(xì)胞系的群體倍增時(shí)間為64h，精巢細(xì)胞系為42h；兩種細(xì)胞系的染色體

4、都具有典型的鱗翅目特點(diǎn)，表皮細(xì)胞系的酯酶的帶型與來(lái)自棉鈴蟲(chóng)5齡蛻皮期的表皮帶型相似性高；表皮細(xì)胞系對(duì)野生型病毒HaSNPV幾乎無(wú)異常反應(yīng)，對(duì)AcMNPV的反應(yīng)主要是發(fā)生典型、高比率的凋亡，精巢細(xì)胞系對(duì)兩種病毒均敏感。 本文新建立的表皮細(xì)胞系是昆蟲(chóng)界少見(jiàn)的體壁表皮組織細(xì)胞系，為昆蟲(chóng)蛻皮相關(guān)基因的調(diào)控表達(dá)研究提供了體外活體實(shí)驗(yàn)材料；由于表皮細(xì)胞系和精巢細(xì)胞系顯示了對(duì)同一病毒HaSNPV的截然不同的反應(yīng)，為研究病毒感染細(xì)胞的機(jī)理提供了