1、第一部分
　　 背景和目的：胰腺癌是一種惡性的消化系統(tǒng)腫瘤，具有強烈的向周圍組織侵襲的傾向以及對化療的抵抗能力，導致胰腺癌病人的預后非常差。SnaIl是一種抑制型的轉錄因子，可以賦予上皮細胞移動以及抗凋亡的能力。其表達在多種腫瘤組織中都有報道。SnaIl 可能在胰腺癌細胞中表達并且賦予胰腺癌細胞侵襲和抵抗化療的能力。
　　 方法：為了論證此假設，我們通過免疫組織化學的方法檢測了SnaIl在胰腺癌組織中的表達，以及和臨床病

2、例指標的相關性。同時我們將SnaIl 編碼基因轉染胰腺癌細胞系Panc-1 細胞，通過Transwell 侵襲小室法檢測SnaIl 對Panc-1 細胞體外侵襲能力的影響；通過MTT 細胞增殖試驗檢測轉染SnaIl基因對Panc-1 細胞增殖以及對5-氟尿嘧啶、吉西他濱等化療藥物敏感性的影響；通過裸鼠接種實驗檢測SnaIl基因對胰腺癌細胞體內生長的影響。
　　 結果：SnaIl在胰腺癌組織中存在著表達，在56例胰腺癌組織中發(fā)現(xiàn)有

3、20例SnaIl的表達呈陽性，陽性率達36[％]。此外SnaIl的表達同淋巴結轉移、遠處轉移都存在有明顯的相關性。Panc-1 細胞在轉染了SnaIl基因之后發(fā)生了明顯的從上皮細胞表型向間葉細胞表型的轉化，同時其在體內外的侵襲能力也大大增強。另外SnaIl的表達還賦予了Panc-1 細胞對5-氟尿嘧啶和吉西他濱的抵抗能力。
　　 結論：Sn ail在胰腺癌組織中存在著表達，并且可以賦予胰腺癌細胞高度的侵襲和抵抗凋亡的能力。Sna

4、Il 有可能作為一種預測胰腺癌惡性程度的標志，發(fā)展針對SnaIl的治療措施可能為提高胰腺癌患者的預后提供新的思路。
　　 第二部分
　　 目的：探討上皮向間葉轉化(EMT)在胰腺癌組織中的發(fā)生情況，研究上皮細胞標記物E-cadherin、間葉細胞標記物vimentin在胰腺癌組織及胰腺癌細胞中的表達情況以及與胰腺癌惡性生物學行為的相關性。
　　 方法：采用免疫組織化學的方法檢測56例胰腺癌組織中E-cadheri

5、n、vimentin蛋白的表達，并與臨床病理資料作對照分析。同時應用Western blot和免疫熒光技術檢測Snail、E-cadherin、vimentin 三種標記物分子在不同胰腺癌細胞Miapaca-2、Panc-1、BxPc-3 中的表達情況，通過Transwell 侵襲實驗檢測不同細胞侵襲能力的差異。
　　 結果：56例胰腺癌組織中26例(46.4[％])觀察到E-cadherin 表達降低，同時6例觀察到vimen

6、tin 表達上調。E-cadherin的表達抑制和胰腺癌的淋巴結浸潤(P=0.021),遠處轉移(P=0.001),病理分級(P=0.049)呈顯著性相關。而6例vimentin 表達上調的胰腺癌組織中有3例發(fā)生了遠處轉移。E-cadherin 表達的降低和vimentin的高表達都與Snail的表達存在著明顯的相關性。在高分化的胰腺癌細胞BxPc-3 中，E-cadherin 呈現(xiàn)高表達，未發(fā)現(xiàn)有vimentin和Snail的表達，相

7、對應的細胞體外侵襲能力較差。在中低分化的胰腺癌細胞Panc-1、Miapaca-2 中vimentin、Snail 表達逐漸增強，E-cadherin 表達明顯降低，相對應的細胞在體外的侵襲能力則大大增強。
　　 結論：胰腺癌的侵襲過程中存在著腫瘤細胞上皮細胞標記物的降低，同時間葉細胞標記物的增強，EMT 可能參與了胰腺癌侵襲性生物學行為。Snail 可能通過調控EMT 從而導致了胰腺癌細胞侵襲性表型。
　　 第三部分<

8、br>　　 目的：探討缺氧微環(huán)境對胰腺癌細胞上皮向間葉轉化的誘導效應以及可能機制。
　　 方法：在缺氧微環(huán)境下培養(yǎng)胰腺癌細胞Panc-1，Transwell 侵襲小室對比檢測細胞在缺氧微環(huán)境下侵襲能力的變化情況。通過Western blot、免疫熒光檢測缺氧對Panc-1 細胞上皮細胞標記分子E-cadherin、間葉細胞標記分子vimentin 表達的影響。同時通過實時熒光定量PCR檢測缺氧對Panc-1 細胞Snail m

9、RNA 表達的影響。為了探討缺氧微環(huán)境誘導胰腺癌細胞發(fā)生表型改變的機制，將編碼HIF-1 α siRNA的真核表達載體pGenesil-1-HIF-1 α及對照載體瞬時轉染Panc-1 細胞，通過缺氧處理，Western blot檢測沉默HIF-1 α之后對Panc-1 細胞E-cadherin、vimentin 表達的影響；逆轉錄PCR檢測抑制HIF-1 α對Snail mRNA 表達的影響；通過Transwell 侵襲小室檢測對細胞

10、體外侵襲能力的影響。
　　 結果：處于缺氧微環(huán)境下的Panc-1 胰腺癌細胞在體外侵襲能力大大增強，缺氧可以抑制上皮細胞標記物E-cadherin、增強間葉細胞標記分子vimentin的表達，活化轉錄因子Snail的表達。缺氧微環(huán)境下通過RNA 干擾技術沉默HIF-1 α之后可以恢復缺氧對E-cadherin的抑制，同時降低vimentin和Snail的表達，抑制缺氧環(huán)境中細胞在體外的侵襲能力。
　　 結論：缺氧微環(huán)境可