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文檔簡介
1、玫瑰黃鏈霉菌Men-myco-93-63對多種植物病原真菌和細菌有較強的抑制作用,溫室和大田試驗表明該菌株的代謝產物對棉花黃萎病和瓜類白粉病有較好的防效作用,其有效成分和作用機理正在研究中。雙親株滅活原生質體融合擺脫了遺傳標記給育種工作帶來的束縛,使融合子的檢出變得直觀,是值得推廣的一種選育高產菌株的方法。
本文對玫瑰黃鏈霉菌Men-myco-93-63和變鉛青鏈霉菌TK24的原生質體分別進行熱滅活和紫外滅活,在PEG40
2、00介導下融合,所得“融合子”以棉花黃萎病菌和馬鈴薯瘡痂病菌為指示菌篩選抗生素高產優(yōu)質菌種,傳代培養(yǎng)檢測高產“融合子”的穩(wěn)定性,并觀察“融合子”的培養(yǎng)特征和形態(tài)特征:利用基因組酶切和可溶性蛋白質電泳驗證融合子與親本的遺傳關系;通過搖瓶發(fā)酵獲得高產融合菌株抗生素粗品的產量,得出增產率;以融合子RH19為代表,采用親株的發(fā)酵培養(yǎng)基對融合子RH19進行搖瓶發(fā)酵實驗,利用薄層色譜(TLC)和高效液相色譜(HPLC)分析融合菌株抗生素粗品。通過玫
3、瑰黃鏈霉菌Men-myco-93-63與變鉛青鏈霉菌TK24原生質體的種間融合實驗,得到了十四株對棉花黃萎病菌和馬鈴薯瘡痂病菌具有抑制作用的融合子,融合子RH19抑菌活性明顯強于玫瑰黃鏈霉菌Men-myco-93-63。經過十次傳代發(fā)現(xiàn),融合子的遺傳穩(wěn)定性良好。高產融合子在固體R2YE培養(yǎng)基及液體燕麥培養(yǎng)基上均產生黃綠色色素,并且培養(yǎng)特征和形態(tài)特征明顯不同于親株。對基因組DNA進行酶切發(fā)現(xiàn)融合子的酶切片段與親本不同;對“融合子”RH19
4、及親本的可溶性總蛋白進行了SDS—PAGE分析,發(fā)現(xiàn)“融合子”RH19的可溶性總蛋白圖譜與雙親有一定的相似性又產生了新的條帶;搖瓶發(fā)酵實驗結果顯示融合子粗提抗生素的產量為0.18g/L,而玫瑰黃鏈霉菌Men-myco-93-63為0.07g/L,增產了159%;TLC和HPLC結果表明此菌株能夠產生親本不能產生的新的次級代謝產物。本研究證實了玫瑰黃鏈霉菌Men-myco-93-63和變鉛青鏈霉菌TK24之間發(fā)生了基因重組。該研究結果為放
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