1、噬菌體表面展示技術是將外源蛋白或多肽以融合蛋白形式展示在噬菌體的殼蛋白上，并能夠保持原有的空間結構和生物活性而受到廣泛關注。表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor,EGFR)是較早發(fā)現(xiàn)的腫瘤相關抗原，上皮來源的惡性腫瘤有不同程度的高表達，利用單克隆抗體治療EGFR陽性表達的惡性腫瘤已取得一定的進展，并進入臨床實驗階段。本實驗構建了EGFR為靶向的重組T7噬菌體載體疫苗，并進一步探討在體的免疫活

2、性以及抗腫瘤作用。 經(jīng)實驗得出如下結論: ①應用RT-PCR技術從A549細胞中克隆了EGFR蛋白膜外的DNA片段。 ②構建pMD18-T重組載體，重組質粒DNA測序鑒定正確。 ③根據(jù)T7噬菌體載體臂的限制性酶切位點，把含相同的限制性酶切位點的亞克隆目的DNA片段直接插入表達載體，構建的重組T7噬菌體表達的融合蛋白質，能識別人EGFR多克隆抗體，保持了原有的功能活性。 ④利用構建的重組T7噬菌體疫

3、苗免疫動物，在動物體內誘導了體液免疫反應和細胞免疫反應；免疫鼠的血清不僅可以識別提取的人EGFR蛋白，而且可以識別A431細胞上的保持空間結構的EGFR蛋白；體外檢測CTL反應，實驗組二個高拷貝數(shù)重組T7噬菌體均產(chǎn)生了CTL反應活性，在倒置顯微鏡下，可見A431細胞周圍大量脾細胞聚集，其中T7415-1b-132殺傷活性最高。針對該片段的誘導產(chǎn)生的特異性抗體和細胞毒性反應為最強。 ⑤異源相同蛋白可能在抗腫瘤疫苗研究中發(fā)揮重要作用