1、目的 聯合利用多種高通量表達譜數據庫資源篩選分析胃癌與正常胃組織間的差異表達基因，探討利用數據庫篩選胃癌與正常胃組織間的差異表達基因信息的可行性及具體方法，尋找胃癌發(fā)生發(fā)展相關基因，為進一步研究胃癌的發(fā)生發(fā)展機制，發(fā)現具有診斷和治療價值的潛在相關基因，為進一步制定基因治療方案提供基礎的依據。 方法 1.應用10個已知的胃癌發(fā)生發(fā)展相關基因進行ESTvNorthern和SAGEVirtualNorthern分析，將分析結果與已

2、知基因表達情況相比較，確定VirtualNorthern篩選胃癌相關基因的可行性。 2.應用美國國立生物技術信息中心(NCBI)中的UniGene數據庫中DDD工具篩查胃癌和正常胃組織的差異表達基因。 3.應用腫瘤基因解剖工程(CGAP)數據庫中基于EST數據的cDNADigitalGeneExpressionDisplayer(cDNADGED)工具篩查胃癌和正常組織差異表達基因。 4.應用腫瘤基因解剖工程(C

3、GAP)數據庫中基于SAGE數據的SAGEDigitalGeneExpressionDisplayer(SAGEDGED)工具篩查胃癌和正常胃組織差異表達基因。 5.將DDD、cDNADGED和SAGEDGED篩選出的基因進行VirtualNorthern分析，選擇在EST和SAGE數據庫中胃癌和正常胃組織中表達差異全部具有有統計學意義(p＜0.05)的基因。 6.將VirtualNorthern篩選出的差異基因與SMD

4、數據庫中胃癌微陣列表達譜數據進行對比分析，選取共同的差異基因作為進一步研究的候選基因。 7.選取5個候選胃癌差異基因用RT-PCR方法進一步在38例胃癌及正常胃組織標本中進行驗證。采用免疫組織化學方法進一步研究ANXA1在38例正常胃粘膜、22例胃癌前病變、38例胃癌組織中的表達差異情況。 結果 1.10個已知胃癌相關基因中，vNorthern分析能確認其中9個基因，表明vNorthern數據分析能篩選出胃癌相關基因，

5、且與基因的在組織中表達具有較高的一致性。 2.DDD工具篩選出差異表達基因165個，其中胃癌組織高表達的差異基因27個，低表達的基因138個。 3.cDNADGED工具篩選出差異表達基因286個，其中胃癌組織表達高表達的基因93個，低表達的基因193個。 4.SAGEDGED工具篩選出差異表達基因181個，其中胃癌組織高表達的基因73個，低表達的基因108個。 5.EST和SAGEvirtualNorth

6、ern分析，共篩選出45個候選差異基因。 6.45個候選差異基因與SMD數據庫中胃癌微陣列表達譜數據對比分析，共確定12個差異基因(CD44、TUBB、ANXA1、EN01、AGR2、PGC、ANXA10、RNASE1、PSCA、TFF1、MSMB、ID1)。 7.12個差異基因中選取5個基因(ANXA1、AGR2、ANXA10、PSCA、MSMB)在38例胃癌及相應正常組織中進行RT-PCR驗證，4個基因(ANXA1、

7、ANXA10、PSCA、MSMB)表達高低與數據庫篩選結果一致。免疫組化分析ANXA1在正常胃粘膜、癌前病變及胃癌中表達呈逐漸升高的趨勢，陽性率分別為10.53％(4/38)、40.91％(9/22)、73.68％(28/38)(p＜0.05)，ANXA1在彌漫型胃癌中表達高于腸型胃癌(p＜0.05)。 結論 聯合多種高通量表達譜數據庫的方法能快速有效地篩選出重要的胃癌相關基因；ANXA1在正常胃粘膜、癌前病變及胃癌中表達呈逐