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文檔簡介
1、雙效菌素(Zwittermicin A,簡稱ZwA)是由蠟狀芽胞桿菌(Bacillus cereus)和蘇云金芽胞桿菌(Bacillus thuringiensis,簡稱Bt)產(chǎn)生的一種新型廣譜的氨基多元醇類抗生素。該抗生素可抑制多種植物病原菌:對卵菌、藻類原生生物具有很高的抑菌活性,對很多革蘭氏陰性與陽性細菌也表現(xiàn)出一定的抑菌活性。 N—?;呓z氨酸內酯(Acyl—homoserine Lactones,簡稱AHLs)是廣泛
2、存在于革蘭氏陰性細菌群體感應系統(tǒng)(Quorum—Sensing System,簡稱QS系統(tǒng))中的信號分子,該信號分子可在細胞內外穿梭,參與多種病原菌致病基因的表達調控,當該分子濃度達到一定閾值時,能夠啟動病原菌致病基因的表達,?;呓z氨酸內酯酶(AHL內酯酶)通過可以降解AHLs信號分子,減弱相關致病基因的表達從而達到抗病的效果。 本研究結合以上兩種物質的不同抗病機理,將來自蘇云金芽胞桿菌中的AHL內酯酶基因(aiiA)導入到Z
3、wA產(chǎn)量不同的蠟狀芽胞桿菌中,得到相應的重組菌株。本研究從兩條途徑來提高AHL內酯酶的作用效果:1.采用蘇云金芽胞桿菌殺蟲晶體蛋白基因cry3Aa的啟動子來增強aiiA基因在細胞內的表達,構建帶有pro3A—aiiA融合基因的重組質粒pBMB686;2.利用蘇云金芽胞桿菌S—層蛋白表面展示技術將AHL內酯酶這一胞內蛋白帶到胞外并錨定在細胞表面,以與環(huán)境中的AHLs分子直接作用,提高其降解活性,構建了同時帶有slh—aiiA和pro3A—
4、aiiA融合基因的重組質粒pBMB0624,并且分別將pBMB686和pBMB0624兩個質粒轉化到蠟狀芽胞桿菌當中,比較其抗病效果。 實驗表明,aiiA基因(pro3A—aiiA和slh—aiiA)均可在重組菌中正常表達,并且不影響受體菌ZwA的表達和產(chǎn)量;感病實驗證明,同時表達ZwA和AHL內酯酶的重組菌對于胡蘿卜軟腐歐文氏菌感染馬鈴薯所引起的病害的抗病效果比單獨含產(chǎn)ZwA或AHL內酯酶的蠟狀芽胞桿菌的抗病效果有明顯增強。說
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