1、目的:研究β2-AR基因轉(zhuǎn)染對兔紫紺型先天性心臟病動物模型慢性缺氧心肌細胞收縮及舒張功能的影響。 方法:采用外科手術(shù)的方法，將成年新西蘭大白兔的主肺動脈與左心耳吻合，建立右向左分流紫紺型先天性心臟病動物模型。 模型建立5周后，分離培養(yǎng)正常、假手術(shù)及紫紺型心臟病動物模型心肌細胞。心肌細胞分為5組： (1)正常對照組(Control)：正常成年兔心肌細胞培養(yǎng)48h。 (2)假手術(shù)組(Sham)：假手術(shù)組成年兔

2、分離培養(yǎng)心肌細胞48h。 (3)紫紺組(CCM)：紫紺型動物模型分離心肌細胞培養(yǎng)48h。 (4)紫紺轉(zhuǎn)綠色熒光蛋白(Ad-GFP)基因組：紫紺型動物模型心肌細胞轉(zhuǎn)染GFP基因，培養(yǎng)48h。 (5)紫紺轉(zhuǎn)β2-AR基因組(Ad-β2AR)：紫紺型動物模型兔培養(yǎng)的心肌細胞轉(zhuǎn)染β2-AR基因，培養(yǎng)48h。 采用細胞功能測定裝置進行單個心肌細胞收縮/舒張功能測定，采用WesternBlot方法檢測各組心肌細胞B2

3、-AR蛋白表達。 結(jié)果: 1、動物模型檢測結(jié)果動物模型建立5周后，心臟彩色多普勒超聲心動圖測定顯示，在大動脈短軸切面，紫紺型兔主肺動脈與左心耳吻合口部位可見全心動周期血流頻譜。與正常兔比較，紫紺型動物模型PO2(45.3±3.7)及SaO2(75.7±6.5)均顯著降低。 2、單個心肌細胞收縮、舒張功能測定結(jié)果 2.1正常兔心肌細胞對Ca2+和ISO的反應(yīng)：正常成年兔心肌細胞分離培養(yǎng)2h，在0.5Hz電刺

4、激下，隨著Ca2+濃度的升高，心肌細胞收縮幅度增加，當(dāng)Ca2+濃度>5mmol/L時，心肌細胞出現(xiàn)搏動節(jié)律紊亂或者細胞痙攣。在2mmol Ca2+濃度下，心肌細胞狀態(tài)及搏動最為穩(wěn)定；隨著ISO濃度的升高，心肌細胞收縮幅度增加，但ISO濃度達到100nmol/L時，細胞收縮幅度趨于穩(wěn)定，繼續(xù)增加ISO濃度時收縮幅度變化不大；當(dāng)ISO濃度超過500nmol/L時，心肌細胞開始出現(xiàn)搏動節(jié)律紊亂或者細胞痙攣。 2.2各實驗組心肌細胞對l

5、SO刺激的反應(yīng)：紫紺組心肌細胞收縮幅度均較同一ISO濃度下正常組心肌細胞收縮幅度明顯降低；紫紺轉(zhuǎn)β2組心肌細胞收縮幅度均較同一ISO濃度刺激下紫紺組明顯升高。 2.3紫紺兔心肌細胞收縮，舒張功能測定結(jié)果：在0.5Hz，2mmol/L Ca2+和100nmol/L ISO的刺激下，與正常組比較，紫紺組心肌細胞收縮幅度明顯降低；TTP和R50明顯延長；靜息長度增加；TTP延長率(25％)低于RT50延長率(41％)，兩者之比(1:1

6、.64)。 2.4 β2-AR基因轉(zhuǎn)染后紫紺兔心肌細胞收縮、舒張功能測定結(jié)果：在0.5Hz，2mmol/L Ca2+和100nmol/L ISO的刺激下，與紫紺組比較，紫紺轉(zhuǎn)β2-AR組心肌細胞收縮幅度明顯增加；TTP和R50明顯縮短，靜息長度增加；TTP恢復(fù)率為99％，而RT50恢復(fù)率為81.7％，兩者差異有顯著性統(tǒng)計學(xué)意義。 3、Western blot檢測心肌細胞β2-AR蛋白表達測定結(jié)果心肌細胞培養(yǎng)48h后，紫紺

7、組心肌細胞中β2-AR蛋白表達水平明顯低于正常組；轉(zhuǎn)β2-AR紫紺組心肌細胞β2-AR蛋白表達明顯高于紫紺組及正常組；正常組與假手術(shù)組相比，紫紺型組與紫紺轉(zhuǎn)GFP組相比，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論： 1、本實驗動物模型低氧狀態(tài)和血流動力學(xué)對心臟的影響與臨床紫紺型先天性心臟病相接近，是研究紫紺型心臟病較為理想的動物模型。 2、紫紺型心臟病動物模型慢性缺氧心肌細胞β2-AR蛋白表達低下，心肌細胞收縮及舒張功能明顯降低