1、碩士學位論文論文題目 論文題目：布魯氏菌抗原蛋白在煙草中的瞬時表達英文題目 英文題目：Transient Expression of BrucellaAntigen Protein in Tobacco學 位 類 學 位 類 別： 理學碩士研 究 生 姓 研 究 生 姓 名： 廖露 學號 學號：2014023155學科 學科(領域 領域)名稱 名稱： 生物學指 導 教 指 導 教 師： 王建英 職稱 職稱：教授協(xié)助指導教 協(xié)助指導教師：

2、 師： 王晶妍 職稱： 職稱：講師2017 年 6 月 15 日分類號： 分類號： Q7 Q7 密 級： 級： 公開 公開U D C ： 學校代碼： 學校代碼： 10127 10127內蒙古科技大學碩士學位論文I摘 要布魯氏菌?。˙rucellosis）是一種由布魯氏菌（Brucella）引起的人獸共患的世界范圍流行性疾病。目前，預防布魯氏菌病最廣泛應用的疫苗為減毒活疫苗，但減毒活疫苗對接種的動物和人可能會造成感染，而且易發(fā)生返祖現(xiàn)象。

3、基因工程疫苗可以克服這一問題，但普通的基因工程疫苗通常采用注射的方式接種，不能引發(fā)粘膜免疫。轉基因植物疫苗則可克服以上缺點，與一般的基因工程疫苗相比，轉基因植物疫苗成本低，更安全，而且還能使機體產生粘膜免疫。為構建植物疫苗做準備，本實驗構建了布菌抗原蛋白基因在煙草中的瞬時表達系統(tǒng)，并快速高效檢測布菌抗原蛋白是否在植物中表達，此實驗建立的布菌抗原蛋白基因植物細胞瞬時表達系統(tǒng)對后續(xù)研究轉布菌抗原基因植物疫苗奠定了重要的基礎。具體內容如下：1

4、. 分別以布菌基因組和含有布菌融合抗原基因的質粒 pJG045-Omp3148-74-BLS 為模板，經 PCR 擴增得到 Omp10、Omp28、Omp3148-74-BLS 基因片段，采用無需限制性構建無縫質粒載體的方法，成功構建了含 Omp10、Omp28、Omp3148-74-BLS 布菌抗原基因的 pET28a 原核表達載體。經 PCR、雙酶切和測序鑒定正確后，IPTG 誘導表達布菌抗原蛋白。SDS-PAGE 電泳結果顯示：I

5、PTG 誘導表達出的 3 種布菌抗原基因的蛋白條帶，與實際目的蛋白大小相符。2. 誘導后的含重組質粒 pET28a-Omp3148-74-BLS 的 TL129 菌體經超聲波處理和破碎包涵體處理，用 NI-IDA 瓊脂糖親和層析柱法純化了目的蛋白，用純化后的目的蛋白免疫家兔，得到兔抗布菌抗原蛋白的抗血清，獲取的抗血清通過 Western blot 和間接ELISA 實驗檢驗其免疫效果。結果顯示：所制備的多克隆抗體能特異性識別融合蛋白Om

6、p3148-74-BLS，而未免疫兔的血清并不與融合蛋白產生特異性免疫反應，表明目的蛋白對動物具有良好的抗原特異性。3. 將 PCR 擴增得到 L7/L12、Omp10、Omp19、Omp28、Omp31 基因克隆到植物表達載體 pJG053 上，經 PCR、雙酶切和測序鑒定正確后，這些載體將用于后續(xù)對布菌各個抗原基因的抗原性與免疫原性的分析。4. 將構建成功的攜帶布菌抗原蛋白 L7/L12、Omp10、Omp19、Omp28、Omp3