1、目的：多發(fā)性骨髓瘤(multiple myeloma，MM)是血液系統(tǒng)的第二大惡性腫瘤，特征表現(xiàn)是克隆性漿細胞惡性增殖，單克隆免疫蛋白異常分泌，凋亡受到阻滯，骨質(zhì)受到破壞以及各種組織臟器受到損傷。雖然硼替佐米(bortezomib)等新藥、新的聯(lián)合化療方案以及自體骨髓干細胞移植支持治療顯著提高了治療效果，但多發(fā)性骨髓瘤目前仍屬于不可治愈性疾病。腫瘤細胞惡性分裂增殖需要合成大量的生物大分子;為了滿足這種需要，細胞選擇代謝重組，激活有氧糖酵

2、解，減弱氧化磷酸化。CADPE和ZZZ-1是新穎天然小分子化合物，課題組前期研究發(fā)現(xiàn)它們具有顯著的抗腸癌、胃癌、惡性膠質(zhì)瘤等的作用，而且其作用機制可能與改變腫瘤細胞的能量代謝有關(guān)。本研究主要觀察CADPE和ZZZ-1是否能夠逆轉(zhuǎn)多發(fā)性骨髓瘤細胞的糖代謝方式，降低腫瘤細胞的活力，并進一步探究其可能的分子機制，為進一步的研究提供依據(jù)。
　　方法：選用人多發(fā)性骨髓瘤細胞U266和RPMI8226為研究對象，首先考察了CADPE和ZZZ-

3、1對多發(fā)性骨髓瘤細胞的糖代謝（包括葡萄糖消耗量，乳酸水平和ATP水平）的影響，而后用MTT法檢測了CADPE和ZZZ-1對細胞活力的影響，用PI單染流式細胞術(shù)研究其對周期的影響，用蛋白質(zhì)免疫印跡技術(shù)(Western Blot)研究其對細胞周期和增殖相關(guān)蛋白的影響，用AnnexinⅤ-FITC/PI雙染流式細胞術(shù)研究其對細胞凋亡的影響，使用泛caspase抑制劑z-VAD FMK、AIF抑制劑N-Phenylmaleimide(NPM)、

4、p38抑制劑SB239063、JNK抑制劑SP600125、ERK抑制劑PD98059、paraptosis抑制劑放線菌酮(CHX)、自噬抑制劑巴伐洛霉素A1(bafilomycin A1)和3-甲基腺苷(3MA)研究其降低多發(fā)性骨髓瘤活力的潛在作用機制。
　　結(jié)果：⑴天然小分子化合物CADPE和ZZZ-1快速顯著地提高多發(fā)性骨髓瘤細胞內(nèi)ATP水平并伴有葡萄糖消耗量的升高和乳酸水平的降低，說明CADPE和ZZZ-1可以抑制多發(fā)性骨

5、髓瘤細胞的糖酵解并促進氧化磷酸化；⑵CADPE和ZZZ-1顯著降低多發(fā)性骨髓瘤細胞的活力，并呈一定的劑量和時間依賴性；⑶CADPE阻滯U266細胞周期于G2/M期，阻滯RPMI8226細胞周期于S期，下調(diào)U266細胞的c-Myc、cyclin D1、CDK4、CDK6、cyclin A、p-Rb蛋白的表達水平，上調(diào)Rb的水平;ZZZ-1阻滯U266和RPMI8226細胞周期均于G0/G1期，下調(diào)RPMI8226細胞的c-Myc、cycl

6、in D1、cyclin D2、CDK4、CDK6、p-Rb蛋白水平并上調(diào)Rb水平，不影響cyclin A的水平；⑷CADPE和ZZZ-1均能誘導多發(fā)性骨髓瘤細胞凋亡，顯著下調(diào)Notch-1的水平并伴有p-Stat3、Bcl-2水平的降低和Noxa水平的升高，但Stat3、Bax、survivin水平未見明顯變化;CADPE誘導的凋亡不能被MAPK（p38、JNK、ERK）抑制劑、泛caspase抑制劑、AIF抑制劑逆轉(zhuǎn)，ZZZ-1誘導

7、的凋亡不能被MAPK(p38、JNK、ERK)抑制劑、AIF抑制劑逆轉(zhuǎn)，可以被泛caspase抑制劑小部分逆轉(zhuǎn)；⑸CADPE和ZZZ-1降低細胞活力的作用均不能被副凋亡（paraptosis）抑制劑和自噬(autophagy)抑制劑逆轉(zhuǎn)。
　　結(jié)論：CADPE和ZZZ-1可顯著地降低多發(fā)性骨髓瘤細胞的活力、阻滯細胞周期和誘導細胞凋亡，其作用機制可能與逆轉(zhuǎn)多發(fā)性骨髓瘤細胞的能量代謝特征、下調(diào)c-Myc、Notch-1、p-Stat3