1、第一部分:C57BL/6小鼠自身免疫性肝炎模型的建立與鑒定
　　 目的:建立自身免疫性肝炎的動(dòng)物模型，在此基礎(chǔ)上探討AIH的發(fā)病機(jī)制及新藥療效。
　　 方法:以同種系肝抗原(S-100)和完全氟氏佐劑兩次腹腔注射免疫C57BL/6小鼠建立AIH的動(dòng)物模型，正常對(duì)照組采用同劑量的PBS緩沖液，并于免疫后第4周末處死小鼠，檢測(cè)血清轉(zhuǎn)氨酶水平，自身抗體ANA和SMA以及肝組織病理檢查，并與正常對(duì)照組進(jìn)行比較。
　　 結(jié)

2、果:病理模型組小鼠一般狀況差，體重增長(zhǎng)不明顯(p=0.000)，免疫后第4周檢測(cè)血清肝臟轉(zhuǎn)氨酶，發(fā)現(xiàn)ALT和AST較正常組明顯升高(ALT:47.63±7.45v.s19.95±0.99，p=0.001；AST:248.37±21.25v.s.93.00±16.61，p=0.000)，部分小鼠血清中出現(xiàn)ANA陽(yáng)性，陽(yáng)性率為26.7％，未檢出SMA陽(yáng)性，肝組織病理學(xué)檢測(cè)可見(jiàn)匯管區(qū)大量炎癥性細(xì)胞浸潤(rùn)，以淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞為主，肝細(xì)胞可見(jiàn)點(diǎn)片狀

3、壞死。
　　 結(jié)論:以同種系肝抗原和完全氟氏佐劑兩次腹腔注射免疫C57BL/6小鼠建立的實(shí)驗(yàn)性自身免疫性肝炎動(dòng)物模型，免疫后第4周即出現(xiàn)人類AIH的實(shí)驗(yàn)室和病理特點(diǎn)，表明建模成功。
　　 第二部分:PD-1/PD-L1，L2在自身免疫性肝炎發(fā)病中的作用研究
　　 目的:研究PD-1(programmed death-1)/PD-L1、L2(programmed death-1ligand1、2)在自身免疫性肝炎(

4、AIH)發(fā)病及炎癥進(jìn)展中的作用。
　　 方法:建立AIH的C57BL/6小鼠動(dòng)物模型，應(yīng)用RT-PCR的方法檢測(cè)小鼠肝臟中PD-1、PD-L1、L2的表達(dá)水平，同時(shí)檢測(cè)小鼠脾臟中IFN-γ、TNF-α及IL-4等細(xì)胞因子的表達(dá)水平，并與正常對(duì)照組進(jìn)行比較。
　　 結(jié)果:PD-1、PD-L1、PD-L2在AIH動(dòng)物模型組中的表達(dá)水平均明顯高于正常對(duì)照組(p<0.05)，IFN-γ、TNF-α及IL-4的表達(dá)水平亦明顯升高(

5、p<0.05)，并且PD-L1的表達(dá)與IFN-γ(r=0.289，P<0.05)呈正相關(guān)，而PD-L2與IL-4(r=0.378，P<0.01)及IFN-γ(r=0.261，P<0.05)之間均存在相關(guān)性。PD-L1、PD-L2與TNF-α之間無(wú)相關(guān)性。
　　 結(jié)論:PD-1/PD-L1、L2在AIH動(dòng)物模型肝臟中的表達(dá)水平明顯增高，并與增高的IFN-γ及IL-4之間存在相關(guān)性，推測(cè)PD-1及其配體在AIH發(fā)病及其病情進(jìn)展中發(fā)揮

6、一定的作用。
　　 第三部分:腫瘤壞死因子拮抗劑治療AIH的初步研究
　　 目的:應(yīng)用腫瘤壞死因子α拮抗劑對(duì)自身免疫性肝炎C57BU6小鼠模型進(jìn)行干預(yù)，初步探索腫瘤壞死因子拮抗劑對(duì)于自身免疫性肝炎的療效。
　　 方法:建立AIH的C57BL/6小鼠動(dòng)物模型，應(yīng)用腫瘤壞死因子α拮抗劑--益賽普0.1mg/0.2mg分別于第一次免疫后2周和4周時(shí)皮下注射，2次/周×4周，檢測(cè)血清肝臟轉(zhuǎn)氨酶水平，肝組織病理學(xué)檢測(cè)，RT

7、-PCR方法檢測(cè)藥物處理組脾臟TNF-α，肝臟中PD-1、PD-L1、L2及TRAF-1和TRAF-2基因表達(dá)水平的變化，并與病理對(duì)照組和正常對(duì)照組之間進(jìn)行比較。
　　 結(jié)果:應(yīng)用益賽普后，血清肝臟轉(zhuǎn)氨酶水平呈下降趨勢(shì)，但經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，并無(wú)顯著性差異(p>0.05)；肝組織病理檢測(cè)結(jié)果顯示肝組織炎癥在用藥后有所改善；肝臟PD-1表達(dá)水平較病理對(duì)照組明顯下降(p-0.000)，而PD-L1，L2無(wú)明顯變化。肝臟TNF-α表達(dá)水平在

8、用藥后明顯降低(p=0.019)。與正常對(duì)照組相比，病理對(duì)照組TRAF-1表達(dá)水平升高，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p-0.422)，TRAF-2基因表達(dá)水平反而明顯降低(p=0.007)；應(yīng)用益賽普治療后，TRAF-1的表達(dá)上調(diào)，與病理對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異(p=0.422)，而TRAF-2基因表達(dá)水平明顯升高(p=0.015)。TRAF-2與TNF-α之間存在著正相關(guān)性(r=0.261，p=0.044)。
　　 結(jié)論:TNF-α、TRA