1、華中科技大學同濟醫(yī)學院博士學位論文大鼠局灶性腦缺血再灌流后DNA損傷、修復與神經細胞死亡機制的研究姓名：楊淵申請學位級別：博士專業(yè)：神經病學指導教師：方思羽2001.4.1■華中辮擻大掌一濟匿掣魔2口口J弄搏j撐地托=定律：試圖從DNAmRNA。蛋白質三個不同的切入點入手，探索缺血性腦損傷后神經元DNA損傷DNA修復一凋亡三者之間的關系，從DNA水平上界定缺血半暗帶及其治療時間窗，從而加深對缺血神經元損傷機制的認識、豐富完善神經元抗損傷

2、的理論，以尋求新的有效的神經元保護策略。研究方法1采用大鼠大腦中動脈阻塞再灌流(MCAO—R)模型，分別觀察缺血30分鐘和2小時再灌注1、6、12、24、48小時各時間點相關基因的表達與激活。2HE染色觀察神經細胞壞死及梗塞范圍的動態(tài)變化。3原位末端標記(TUNEL)技術觀察缺血再灌注后凋亡細胞的時空分布動態(tài)變化規(guī)律，以及神經細胞凋亡與壞死的時空關系。4免疫組織化學和原位雜交的方法從蛋白質和mRNA水平觀察不同缺血／再灌流時間下p53表

3、達空間和數量的改變，并與TUNEL技術相結合，觀察p53表達與凋亡的時空關系。5免疫組織化學和原位雜交技術觀察缺血再灌流后DNA修復蛋白DNAPKcs、PARP基因表達的時空分布改變，WesternBlot了解缺血再灌流對DNAPKcs、PARP蛋白的水解，結合TUNEL技術觀察DNA—PKcs、PARP基因表達、降解與凋亡的時空關系。6逆轉錄聚合酶鏈反應(RT—PCR)和原位雜交技術相結合觀察缺血再灌流后caspase一3mRNA表達