1、百合病見于張仲景的《金匱要略》，與情志失調(diào)關系密切。其臨床表現(xiàn)與抑郁癥的診斷標準有較明顯的相似之處。百合知母湯為治療百合病的方藥之一，由百合和知母兩味藥組成。本課題系統(tǒng)研究了百合知母湯的化學成分，鑒定22個化合物，其中1個為新化合物，其它化合物均為首次從百合知母湯中分離得到。針對其富含的甾體皂營，確定了總皂苷的提取和純化工藝，并建立了皂苷的含量測定方法。采用小鼠尾懸掛、大鼠強迫游泳和慢性應激模型，對百合知母湯和總皂苷的抗抑郁作用及作用機

2、制進行了研究，結果提示，百合知母總皂苷是百合知母湯抗抑郁作用的活性成分之一；百合知母總皂苷抗抑郁作用很有可能與其增加腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)、逆轉HPA軸功能亢進等有關。本課題闡明了經(jīng)典方百合知母湯抗抑郁的物質(zhì)基礎，同時對其抗抑郁有效部位總皂苷的作用機制進行了初步探討，為抗抑郁藥物的研究奠定了科學基礎。 神經(jīng)內(nèi)分泌抑郁癥是一種情感性精神障礙，臨床上以情緒低落、思維遲緩和精神運動性抑制為特征，其它癥狀包括喪失自尊、不恰當?shù)膬?nèi)疚感、死亡和自殺念

3、頭、注意力集中程度降低以及睡眠和食欲減退，還可能伴有各種軀體癥狀。 抑郁癥是一種最普通的精神疾病，在西方工業(yè)發(fā)達國家終身抑郁癥的發(fā)病率在6％～8％之間，隨著人口的逐步老齡化，抑郁癥在60歲以上人群中的發(fā)病率將高達20％～50％。根據(jù)世界衛(wèi)生組織發(fā)表的《2001年世界衛(wèi)生報告》，抑郁癥目前已成為世界第四大疾患，到2020年抑郁癥可能成為僅次于心臟病的第二大疾病，抑郁癥正成為一個嚴重的全球問題。 抗抑郁藥物的研發(fā)在國外很受重

4、視，據(jù)估計目前全世界有 100 家企業(yè)正在進行有關治療抑郁癥藥物的研制工作。抑郁癥發(fā)病機制甚為復雜，誘發(fā)原因較多，針對某單一環(huán)節(jié)的藥物往往難以取得滿意療效。合成抗抑郁藥大多存在抗抑郁譜窄、副作用大、藥價高和易復發(fā)等缺陷。因此，國內(nèi)外在抗抑郁藥的研制與開發(fā)方面越來越注重傳統(tǒng)藥(特別是有兩千多年歷史的中草藥)。 百合病最早見于張仲景的《金匱要略》，與情志失調(diào)關系密切。《金匱．百合狐惑陰陽毒病證治》篇將“百合病”描述為：“意欲食復不能

5、食，常默然，欲臥不能臥，欲行不能行，飲食或有美時，或有不用聞食臭時，如寒無寒，如熱無熱，口苦，小便赤，諸藥不能治，得藥則劇吐利，如有神靈者，身形如和，其脈微數(shù)?！睆陌俸喜〉呐R床表現(xiàn)看，與抑郁癥的診斷標準有較明顯的相似之處，如：喜悲傷欲哭、常默默符合抑郁癥的特異癥狀(必備癥狀)—情緒低落：欲臥不能臥與其基本癥狀之一的多數(shù)抑郁患者以睡眠障礙為特征相接近；意欲食復不能食、飲食或有美時、或有不用聞食臭時、如寒無寒、如熱無熱，與抑郁患者的軀體癥狀

6、也有相似之處。從百合病因來看，“傷寒大病之后，余熱未解，百脈未和；或平素多思不斷，情志不遂，或偶觸驚疑，卒臨景遇，因而形神俱病”。余熱未盡或情志不遂，郁而化火耗傷心肺的陰液，形成心肺陰虛內(nèi)熱。心主血脈，肺主氣而司治節(jié)，朝百脈，故心肺功能正常，則氣血調(diào)和而百脈皆得其養(yǎng)，若心肺陰虛成病，則氣血失調(diào)百脈受累，故證候百出。氣血充盛，則思考敏捷，精神充沛，若陰血不足則神明失養(yǎng)，故出現(xiàn)種種精神恍惚不定的精神和軀體癥狀。所以現(xiàn)代不少醫(yī)家都將中醫(yī)的百合

7、病歸屬于抑郁癥的范疇。百合知母湯為治療百合病的方藥之一，由百合和知母兩味藥組成。百合寧心安神，潤肺止咳；知母清熱瀉火，滋陰潤燥。百合甘寒清潤而不膩，知母苦寒降火而不燥。百合偏于補，知母偏于瀉。二藥伍用，一潤一清，一補一瀉，共奏潤肺清熱，寧心安神之效。主治陰虛或溫熱病后余熱末清，以致頭昏、心煩不安、失眠等癥以及情志不遂，以致精神恍惚、不能自制等癥。 本課題系統(tǒng)研究了百合知母湯的化學成分，利用硅膠、大孔樹脂、sphadexLH-20

8、、反相硅膠柱層析、中壓柱層析及HPLC等分離手段，共分得27個化合物單體，應用理化常數(shù)測定和光譜(UV，IR，MS，<'1>H-NMR，<'13>C-NMR, 2D-NMR)分析技術鑒定了其中的 22 個。在闡明百合知母湯物質(zhì)基礎后，針對其中富含的甾體皂苷類成分，進行了總皂苷的提取和純化工藝研究，結果表明，百合知母總皂苷的提取工藝為：百合和知母(2：1)藥材粉碎，過14目篩，用30％乙醇作提取溶媒滲漉提取，先以3倍量溶媒浸潤6h，再收集

9、24倍量滲漉液，滲漉速度為1.2BV/h。百合知母總皂苷的具體純化工藝為：百合和知母(2：1)藥材30％乙醇滲漉液減壓濃縮至濃度為0.75：1(藥材重量：溶液體積)，冷卻、過濾，濾液即為上柱樣品液。將上柱樣品液按0.8BV上樣量通入裝有AB-8型樹脂的色譜柱中，依次用12BV的蒸餾水、12BV的20％乙醇、10BV的70％乙醇、8BV的95％乙醇梯度洗脫，流速為2.5BV/h。70％乙醇洗脫液減壓濃縮，干燥并粉碎得淡黃色粉末可得百合知母

10、總皂苷成品。 對于新工藝得到的百合知母總皂苷，采用分光光度法測定百合知母總皂苷的含量，三批次百合知母總皂苷的平均含量為 74.37％；采用 HPLC-ELSD 法測定百合知母總皂苷中知母皂苷B2和纖細薯蕷皂苷的含量，其中知母皂苷B2的含量為35％左右，纖細薯蕷皂苷的含量為18％左右。兩者含量之和≥53％。 在百合知母湯抗抑郁作用方面，采用抗抑郁藥的高選擇性動物模型小鼠尾懸掛和大鼠強迫游泳實驗模型，對其抗抑郁作用進行了初步

11、研究。結果表明，百合知母湯可以對抗小鼠、大鼠的失望行為，使小鼠尾懸掛的失望時間和大鼠強迫游泳的不動時間顯著縮短，具有抗抑郁效應，且呈一定的劑量依賴關系。 在此基礎上，進一步對百合知母總皂苷的抗抑郁作用進行了研究，結果表明，百合知母總皂苷亦可以對抗小鼠、大鼠的失望行為，使小鼠尾懸掛的失望時間和大鼠強迫游泳的不動時間顯著縮短，具有抗抑郁效應，且呈一定的劑量依賴關系；在慢性應激抑郁模型實驗中，百合知母總皂苷組大鼠在水平運動、垂直運動、

12、清潔動作次數(shù)糖水消耗等方面得到了改善。結果提示，百合知母總皂苷是百合知母湯抗抑郁作用的活性成分之一。 從腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)和神經(jīng)內(nèi)分泌2個方面探討百合知母總皂苷抗抑郁的作用機理，結果表明，百合知母總皂苷能顯著增加大鼠腦內(nèi)NE、5-HT和DA的含量，并使慢性應激抑郁模型大鼠血漿CORT和ACTH含量恢復正常。表明百合知母總皂苷抗抑郁作用很有可能與其增加腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)、逆轉HPA軸功能亢進等有關。 此外，百合知母湯的毒理學研究結果顯

13、示，灌胃給予百合知母湯對小鼠的29394.4 mg/kg 體重，相當于推薦人臨床劑量108mg浸膏/kg體重的272.2倍；大鼠對百合知母湯的MTD為15238mg/kg，相當于推薦人臨床劑量108mg浸膏/kg體重的141.1倍；給SD大鼠連續(xù)灌胃給予百合知母湯3g生藥/kg/d、9g生藥/kg/d和30g生藥/kg/d 6個月，各給藥組大鼠飲食、活動正常，無明顯毒性反應：食量、體重與空白對照組大鼠比，無顯著差異；百合知母湯連續(xù)灌胃對