1、表沒食子兒茶素沒食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate，EGCG)是綠茶多酚中兒茶素的主要成分，具有抗氧化、抗炎、抗癌等生物活性，其中針對EGCG的化學預防和抗炎活性研究已經(jīng)成為熱點。有關EGCG化學預防作用的研究已經(jīng)通過細胞實驗，動物實驗和臨床實驗獲得了一些成果。目前很多體外實驗已證明EGCG對細胞內(nèi)多種信號通路具有調(diào)控作用，這些通路包括JAK/STAT、MAPK、PI3K/AKT、Wnt、Notch、NF-κ

2、B和AP-1。EGCG通過抑制各種轉錄因子來調(diào)節(jié)細胞內(nèi)各種炎癥相關因子的表達，這些轉錄因子包括Sp1、NF-κB、AP-1、STAT1、STAT3和FoxO1。近些年研究表明，EGCG對巨噬細胞產(chǎn)生的多種促炎因子表達具有抑制作用，但這一作用的分子機制還不是完全清楚。目前研究表明，EGCG通過結合巨噬細胞表面相應的67LR，來下調(diào)巨噬細胞炎性因子的表達，從而達到抗炎消炎的作用。然而，巨噬細胞作為生物體內(nèi)重要的免疫細胞，其極化與炎癥的發(fā)生發(fā)

3、展有著密切的聯(lián)系。不同表型的巨噬細胞對炎癥的作用也是不同的。M1型巨噬細胞介導炎癥反應，促進炎癥發(fā)生，能夠分泌TNF-α、IL-1β、NO等促炎因子。M1型巨噬細胞以高表達iNOS為標志;M2型巨噬細胞對炎癥具有抑制作用，在組織損傷修復和纖維化中具有重要作用。M2型巨噬細胞以高表達Arg-1為標志。因此為了考察EGCG對巨噬細胞表型的影響，本課題選取了iNOS和Arg-1兩種炎癥相關酶來檢測。另外，本課題還選取了在炎癥反應中有重要作用的

4、ICAM-1和VCAM-1兩種粘附分子來進行檢測。
　　本課題采用LPS誘導的小鼠巨噬細胞作為炎癥模型。所用細胞分別選取小鼠巨噬細胞RAW264.7細胞系和原代小鼠腹腔巨噬細胞。根據(jù)本課題組之前對RAW264.7細胞炎癥模型的研究結果來確定實驗方案。實驗采用EGCG預處理2h，處理濃度分別為12.5μM、25μM和50μM，同時設立空白處理和LPS(1μg/ml)處理作為對照，然后再用LPS(1μg/ml)處理24h后取材檢測。用

5、實時熒光定量PCR檢測iNOS、Arg-1、ICAM-1和VCAM-1的mRNA水平，并用ELISA檢測四種因子蛋白的表達量。實驗結果表明，LPS處理可使iNOS、Arg-1、ICAM-1和VCAM-1基因表達量升高。經(jīng)過EGCG預處理后，LPS誘導的小鼠巨噬細胞中iNOS、Arg-1、ICAM-1和VCAM-1的基因表達量相比LPS組，在mRNA水平和蛋白水平都有所下降。并且，四種因子的表達量隨著EGCG預處理濃度的增大，呈現(xiàn)下降趨勢

6、。這表明EGCG(12.5～50μM)預處理能明顯抑制LPS誘導的小鼠RAW264.7巨噬細胞系和原代小鼠腹腔巨噬細胞中iNOS、Arg-1、ICAM-1、VCAM-1基因的表達。這種抑制作用是在基因轉錄水平上的。EGCG預處理對四種因子表達的抑制作用隨著EGCG濃度的增大而逐漸增強。因此，在12.5～50μM的濃度范圍EGCG對LPS誘導的小鼠巨噬細胞四種炎癥相關因子表達的抑制作用存在劑量依賴性。根據(jù)本課題研究結果中iNOS和Arg-