1、研究背景:
　　骨髓增生異常綜合征(Myelodysplasticsyndromes，MDS)是一組異質性克隆性造血干細胞疾病。相對低危MDS患者骨髓微環(huán)境中一些應激性刺激可引起造血干/祖細胞過度凋亡從而導致骨髓無效造血和外周血細胞數(shù)減少，由此招致的嚴重感染、出血、心力衰竭等并發(fā)癥是影響其生存期和生存質量的主要原因。目前普遍認為，抑制骨髓造血細胞高調亡可明顯提升骨髓造血能力，延長相對低危MDS患者生存期，從而改善預后。血紅素加氧酶

2、-1（Hemeoxygenase-1，HO-1）作為一種抗氧化應激性蛋白酶，參與清除細胞內氧自由基，抑制細胞凋亡，這種細胞保護作用可能與MAPK信號通路有關。目前研究顯示，MAPK信號轉導的異常參與了病態(tài)骨髓造血細胞增殖與凋亡的調控，改善MAPK信號通路轉導異常有助于促進MDS骨髓正常造血。然而HO-1作為上游分子能否在相對低危MDS中調控MAPK信號通路分子活性，尚無文獻報道。
　　研究目的:
　　本研究旨在檢測HO-1蛋

3、白基礎表達水平與患者預后的關系，體外應用Hemin上調HO-1的表達檢測其對相對低危MDS患者MAPK信號通路分子活性的影響，初步探討HO-1的作用機制和臨床靶向治療的可能。
　　研究方法:
　　1.研究對象:選取70例初診相對低危MDS患者，全面采集臨床資料，其中有難治性貧血(RA)58例，難治性貧血伴環(huán)形鐵粒幼細胞增多12例。以20例健康志愿者作為對照組。
　　2.標本處理:收集70例患者與對照組骨髓標本，用淋巴細

4、胞分離液分離骨髓單個核細胞(BMMNCs)。在70例相對低危MDS患者中隨機選取20例，每例分別給予不同終濃度（5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L）的HO-1誘導劑Hemin體外孵育48小時后，收集細胞備用。
　　3.實時熒光定量逆轉錄聚合酶鏈反應(Q-RT-PCR)檢測BMMNCs中HO-1mRNA的表達:檢測70例相對低危MDS患者和正常對照組HO-1mRNA的基礎表達水平;檢測不同濃度Hemin干預后各實驗組

5、HO-1mRNA的表達水平的變化。
　　4.Westernblot檢測BMMNCs中HO-1蛋白及MAPK通路信號分子的活性:檢測70例相對低危MDS患者和正常對照組HO-1蛋白的基礎表達水平;檢測不同濃度Hemin干預后各實驗組HO-1蛋白的相對表達水平的變化及MAPK通路中細胞外調節(jié)蛋白激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和p38絲裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)磷酸化表達水平的變化。
　　5.病例隨訪:分

6、析患者病程中的病情變化直至疾病較前進展或隨訪結束，計算患者無進展生存(PFS)時間，分析HO-1蛋白的基礎表達水平與PFS之間的關系。
　　6.統(tǒng)計學處理:利用SPSS17.0軟件，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。組間比較使用LSD-t進行均數(shù)間的多重比較，不符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)組間兩兩比較用秩和檢驗。進行Kaplan-Meier生存分析，Log-rank檢驗比較生存曲線。用Cox風險比例模型分析HO-1對PFS的影響。用Spear

7、man法進行相關性分析。
　　結果:
　　1.單因素生存分析顯示，HO-1高表達組患者中位PFS時間為40.8(6.4～57.6)個月，低表達組患者中位PFS時間為32.6(6.3～51.5)個月，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義(P=0.027)。COX回歸分析顯示，HO-1蛋白的表達水平是判斷相對低危組MDS預后的獨立影響因素（HR=0.206，95％CI為0.064～0.659;P=0.008）。相關性分析顯示，相對低危組中H

8、O-1蛋白表達水平與患者外周血的血紅蛋白水平呈正相關(r=0.389，P＜0.05)。
　　2.相對低危MDS患者BMMNCs中HO-1mRNA和蛋白基礎表達水平與正常對照組的表達水平無顯著差異(P＞0.05)。經不同濃度Hemin干預后，相對低危MDS患者hemin干預的各實驗組中HO-1mRNA的表達水平較無Hemin干預組均有升高（P＜0.05）;經不同濃度Hemin干預后，正常健康人各實驗組中HO-1mRNA的表達水平較無

9、Hemin干預組略有升高，但未達到統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。隨著Hemin干預濃度的增加，相對低危MDS患者HO-1蛋白表達量逐漸升高，p38MAPK信號分子磷酸化表達水平逐漸降低，ERK和JNK信號分子磷酸化表達水平逐漸升高，呈濃度梯度依賴性(P＜0.05)。
　　3.在相對低危MDS中用20μmol/LZnPP-(IX)和20μmol/Lhemin共同干預后，隨著HO-1蛋白表達量的降低，p38MAPK信號分子磷酸化表達水平

10、升高，ERK和JNK信號分子磷酸化表達水平降低(P＜0.05)。
　　結論:
　　1.HO-1蛋白的表達水平是判斷相對低危組MDS預后的獨立影響因素。上調HO-1的表達可能成為阻止MDS病情進展的新的治療靶點。HO-1可能通過延長患者無進展生存期、促進紅系造血改善相對低危MDS患者的預后狀況。
　　2.在相對低危MDS中，HO-1可增加促增殖信號途徑分子ERK和JNK的活性，并抑制促凋亡信號途徑分子p38MAPK的活性