1、本文主要從以下幾個方面進行論述:
　　第一部 分蛋氨酸亞砜還原酶A在小膠質細胞炎性激活中的作用
　　目的：蛋氨酸亞砜還原酶A（Methionine sulfoxide reductase A，MsrA）是蛋氨酸亞砜還原酶家族的重要成員之一，近年來由于其在體內氧化還原過程中的作用受到了廣泛關注。MsrA表達于高等動物的多數組織中，在心臟、肝臟等組織中表達尤為豐富。在中樞神經系統(tǒng)中，MsrA在包括海馬、皮層、中腦等在內的多個腦區(qū)

2、中均有分布。MsrA可以修復發(fā)生氧化損傷的蛋白，減緩氧化應激，對包括神經元在內的多種細胞具有神經保護作用。迄今為止，關于MsrA在小膠質細胞中的表達及其功能鮮有文獻報道。鑒于氧化應激在小膠質細胞過度激活及神經炎癥中的重要作用，本部分實驗旨在研究小膠質細胞中是否存在MsrA表達，以及MsrA是否對脂多糖（lipopolysaccharides，LPS）誘導的小膠質細胞激活及其介導的炎癥反應具有調控作用。
　　方法：通過RT-PCR技

3、術在mRNA水平確定原代培養(yǎng)的大鼠小膠質細胞中是否存在MsrA mRNA表達；通過Western blotting方法在蛋白質水平確定原代培養(yǎng)的大鼠小膠質細胞中是否存在MsrA蛋白表達；通過對原代培養(yǎng)的大鼠小膠質細胞和大鼠腦片進行免疫熒光標記，在形態(tài)學水平確定小膠質細胞中是否存在MsrA的表達以及MsrA的分布情況；利用慢病毒轉染技術研究MsrA沉默對于LPS誘導的小膠質細胞激活及其介導的炎癥反應的影響；通過轉導基因重組Tat-大鼠源性

4、MsrA融合蛋白（Tat-rMsrA fusion protein，Tat-rMsrA）外源性補充小膠質細胞中的MsrA，研究MsrA上調對于LPS誘導的小膠質細胞激活及其介導的炎癥反應的影響；利用大鼠急性神經炎癥模型，在動物水平研究Tat-rMsrA轉導對于小膠質細胞激活以及神經炎癥的影響。
　　結果：（1）從mRNA水平和蛋白質水平分別證實原代培養(yǎng)的大鼠小膠質細胞中存在MsrA的表達，免疫熒光證實MsrA在小膠質細胞的胞漿和胞

5、核中均有分布；（2）LPS可誘導小膠質細胞中的MsrA表達上調；（3）慢病毒沉默小膠質細胞中的MsrA可加劇LPS誘導的小膠質細胞激活及其介導的炎癥反應；（4）向小膠質細胞中轉導基因重組透膜性蛋白Tat-rMsrA可抑制LPS誘導的小膠質細胞激活及其介導的炎癥反應；（5）在大鼠急性神經炎癥模型中，向海馬齒狀回區(qū)域注射Tat-rMsrA可抑制LPS誘導的小膠質細胞激活以及致炎因子的產生。
　　結論：小膠質細胞中存在MsrA的功能性表

6、達，且MsrA可負性調控LPS誘導的小膠質細胞激活及其介導的炎癥反應。
　　第二部分 蛋氨酸亞砜還原酶A負性調控小膠質細胞炎性激活的機制
　　目的：小膠質細胞介導的炎癥反應和活性氧（reactive oxygen species，ROS）密切相關。ROS可以作為“信號分子”激活絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases，MAPKs）以及核因子-κB（nuclear-factor k

7、appa B，NF-κB）等在小膠質細胞介導的免疫和炎癥反應中發(fā)揮關鍵作用的信號級聯(lián)反應，從而加劇小膠質細胞的異?；罨约把装Y反應。因此，內源性的抗氧化系統(tǒng)可能是炎癥反應加劇時重要的“剎車”機制。已有研究報道蛋氨酸氧化-還原循環(huán)在清除ROS以及保護蛋白質的關鍵位點免受ROS攻擊的過程中扮演重要角色，而MsrA是調控蛋氨酸抗氧化防御系統(tǒng)的關鍵酶，因此，本部分實驗旨在研究小膠質細胞中的MsrA能否通過催化ROS和蛋氨酸（methionine

8、，Met）反應清除LPS誘導的ROS生成，并進而抑制MAPKs以及NF-κB等信號通路，從而減緩LPS誘導的小膠質細胞激活及其介導的炎癥反應。
　　方法：通過western blotting方法檢測轉導基因重組透膜性蛋白Tat-rMsrA對于LPS誘導的p38、細胞外信號調節(jié)蛋白激酶（extracellular signal-regulated kinase，ERK）、c-jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal ki

9、nase，JNK）以及核因子-κB抑制因子α（inhibitor of kappa Bα，IκBα）磷酸化的影響；通過細胞免疫熒光技術研究轉導基因重組透膜性蛋白Tat-rMsrA對于LPS誘導的NF-κB的p65亞基入核的影響；通過胞內自由基檢測以及胞外超氧化物測定等方法研究轉導基因重組透膜性蛋白Tat-rMsrA對于LPS誘導的ROS生成的影響；并通過電子自旋共振（electron spin resonance，ESR）、魯米諾化學發(fā)

10、光檢測以及蛋氨酸亞砜檢測等技術研究Tat-rMsrA清除ROS的作用機制。
　　結果：（1）向小膠質細胞中轉導基因重組透膜性蛋白Tat-rMsrA可抑制LPS誘導的小膠質細胞中p38、ERK等MAPKs信號通路的激活；（2）向小膠質細胞中轉導基因重組透膜性蛋白Tat-rMsrA可抑制LPS誘導的小膠質細胞中NF-κB信號通路的激活；（3）向小膠質細胞中轉導基因重組透膜性蛋白Tat-rMsrA可減緩小膠質細胞激活所引起的氧化應激；（