1、手性是指化學(xué)物質(zhì)與其鏡像分子的不重疊特性，是生物學(xué)領(lǐng)域被廣泛認(rèn)知的一個(gè)現(xiàn)象。手性物質(zhì)的各對(duì)映異構(gòu)體常常有較大的生物活性區(qū)別。有機(jī)磷農(nóng)藥有超過(guò)25％的都具有對(duì)映體選擇性。東亞飛蝗（Locusta migratoria(Meyen)）是主要的世界性害蟲(chóng)之一，對(duì)禾本科以及莎草科的威脅很大。飛蝗的防治工作目前主要以噴灑有機(jī)磷等殺蟲(chóng)劑的傳統(tǒng)化學(xué)防治方法為主，隨著農(nóng)藥的多年施用，引起了飛蝗的抗藥性，進(jìn)而導(dǎo)致施藥量的增加、抗蟲(chóng)成本破壞的提升以及土壤水

2、體環(huán)境的破壞。
　　通過(guò)對(duì)水胺硫磷(ICP)混旋體的手性拆分，進(jìn)行飛蝗半致死量LD50的確定。比較ICP各對(duì)映異構(gòu)體影響下，飛蝗羧酸酯酶(CarEs)、谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GSTs)和乙酰膽堿酯酶(AChE)的相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄水平、各組蟲(chóng)體酶活性測(cè)定以及對(duì)照組體外酶敏感性的差異，探究造成ICP對(duì)映體在東亞飛蝗體內(nèi)毒性差異的機(jī)理。HPLC法（Chiracel OD，正己烷/異丙醇=90/10，25℃，0.8 mL·min-1，230n

3、m）對(duì)混旋ICP進(jìn)行手性拆分。取東亞飛蝗3齡若蟲(chóng)為試驗(yàn)材料，用丙酮將ICP對(duì)映體分別配制成5個(gè)適當(dāng)濃度；各濃度組滴加30只，丙酮作為參照。室溫正常飼養(yǎng)24h后，利用SPSS19.0求對(duì)映體半致死量 LD50。依據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)及飛蝗基因數(shù)據(jù)庫(kù)，獲取 CarEs、GSTs和AChE相關(guān)基因序列并設(shè)計(jì)引物，利用Real-Time PCR技術(shù)，檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組蟲(chóng)體內(nèi)各酶基因的轉(zhuǎn)錄水平。取蝗蟲(chóng)組織樣本稱重后，按照1:10(W/V)加入 PBS勻漿，冷凍離

4、心制備酶液；以α-NA、β-NA和α-NB為底物，按照Van Asperen及朱坤炎的方法測(cè)定CarEs活性；以還原型谷胱甘肽(GSH)為底物，測(cè)定GSTs活性；以ATC為底物，按照Ellman的方法測(cè)定AChE活性；用對(duì)照組進(jìn)行CarEs、GSTs和AChE活性體外抑制。(+)/(-)-ICP的半致死量LD50分別為0.609 mg·kg-1蟲(chóng)重和79.412 mg·kg-1蟲(chóng)重，毒性差異達(dá)到130倍。(+)-ICP滴加后，東亞飛蝗L

5、mCesA4和LmCesA5基因轉(zhuǎn)錄均受到抑制， CarEs酶活性均隨著(+)-ICP濃度增加而被抑制。(-)-ICP滴加后，LmCesA4表達(dá)量達(dá)到了4.65倍，遠(yuǎn)高于LmCesA5。染毒蝗蟲(chóng)的總酯酶和CarEs活性有手性區(qū)別。體外抑制實(shí)驗(yàn)表明(+)-ICP對(duì) CarEs酯酶分解β-NA時(shí)卻出現(xiàn)了極強(qiáng)的抑制。(-)-ICP和低濃度(+)-ICP會(huì)隨著農(nóng)藥濃度的上升，引起飛蝗體內(nèi)GSTs活性顯著上升；飛蝗GSTs體外抑制實(shí)驗(yàn)表明，(+)

6、/(-)-ICP濃度的上升都會(huì)極顯著引起對(duì)照組GSTs活性的下降，(-)-ICP半抑制濃度IC50為(+)-ICP的10.5倍；ICP對(duì)映體滴加后，LmGSTs4 和LmGSTt1在(+)-ICP中有顯著更高的表達(dá)水平。LmGSTs4、LmGSTs7、LmGSTt1是引起飛蝗對(duì)(+)-ICP抗性的主要原因。LmGSTd1、LmGSTs1、LmGSTs3、LmGSTs5、LmGSTs6和LmGSTs7過(guò)量表達(dá)是引起飛蝗對(duì)(-)-

7、ICP抗性的主要原因。Lm-ace1mRNA表達(dá)隨各對(duì)映體濃度的增加，都經(jīng)歷了先升高后下降的趨勢(shì)，提升表達(dá)倍數(shù)均在4.4~14.9倍。東亞飛蝗的AChE活性，隨(+)-ICP濃度的增加呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，隨(-)-ICP濃度的增加呈現(xiàn)上升的趨勢(shì)。在AChE體外活性抑制實(shí)驗(yàn)中，隨著(+)/(-)-ICP濃度的增加，ICP對(duì)映體對(duì)東亞飛蝗 AChE的抑制程度也在逐漸增強(qiáng)，(-)-ICP半抑制濃度IC50為(+)-ICP的10.4倍。
　　研