1、目的：慢性心力衰竭(CHF)是各種心臟疾病的終末階段，以心室重構和神經內分泌過度激活為基本特征的臨床綜合征。隨著社會進入老齡化，心血管疾病發(fā)病率的增高，CHF的發(fā)病率正逐年上升。下丘腦室旁核(PVN)作為內臟活動和神經內分泌調節(jié)的重要核團，是調控交感神經傳出活動最重要的中樞位點和整合部位。研究證實心衰時PVN內神經化學因素如活性氧簇(reactive oxygen species，ROS)、炎性細胞因子(proinflammatory

2、cytokines，PIC)等的改變，可能是促發(fā)心衰時交感神經傳出增加的重要因素。核因子-κB(NF-κB)廣泛分布于全身細胞和組織，在免疫應答和炎癥反應等過程中參與眾多因子的基因轉錄調控過程。近年來研究發(fā)現，NF-κB在心衰大鼠重要的心血管調節(jié)中樞PVN內表達明顯增多，NF-κB通過一系列信號轉導途徑介導CHF時循環(huán)細胞因子的中樞作用，誘導炎性反應和細胞凋亡，參與心力衰竭的發(fā)病機制。慢性心衰時循環(huán)中高水平的醛固酮亦可通過中樞效應影響心

3、室重建，其主要通過心肌的醛固酮受體介導心肌肥厚和心肌重構，其增加是心衰發(fā)生的獨立的危險因素。本研究采用冠脈左前降支結扎術致急性心肌梗死制備大鼠CHF模型，飲水中分別給予NF-κB拮抗劑吡咯烷二硫代氨基甲酸鹽(PDTC)及選擇性鹽皮質激素受體拮抗劑依普利酮(EPL)干預處理后，觀察血漿醛固酮水平與PVN內NF-κB蛋白表達的變化對心衰進程的影響，探討其相互作用及其對心肌細胞凋亡的調控，為心衰的中樞研究及治療探索新的思路。
　　 方

4、法：⑴成年健康雄性SD大鼠70只，體重250～300g，由山東中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供。隨機分為：慢性心衰組(CHF組)和假手術組(SHAM組)。CHF組行冠脈左前降支結扎術致急性心肌梗死，制備大鼠CHF模型；假手術組只穿線不結扎。CHF組再隨機分為未治療組(CHF組，n=20)、NF-κB抑制劑吡咯烷二硫代氨基甲酸鹽干預組(PDTC組，n=20)和鹽皮質激素受體拮抗劑依普利酮干預組(EPL組，n=20)，假手術組(SHAM組，n=1

5、0)作為正常對照。治療組大鼠飲水中分別給予PDTC(150 mg/kg/d)，或EPL(30 mg/kg/d)，治療持續(xù)6周。⑵6周后，測定左心室濕重/體重比(LVW/BW(mg/g))，右心室濕重/體重比(RVW/BW(mg/g))和肺濕重/體重比(LW/BW(mg/g))評價心功能及心衰程度。⑶大鼠頸動脈血注入冰水預冷的EDTA抗凝管中，混勻后離心(4℃，3000rpm，10min)，取上清置于Tube管中，采用放射免疫法測定血漿醛

6、固酮水平。⑷制備心肌組織石蠟標本，心肌細胞凋亡采用TUNEL法檢測。細胞核呈棕褐色或者呈棕黃色者為凋亡陽性細胞，光鏡下判定其分布情況，每張切片拍攝5個陽性視野。心肌細胞凋亡率是凋亡陽性細胞數占觀察心肌細胞數的比例，心肌細胞凋亡指數(AI)(％)=(心肌細胞凋亡細胞核數/正常心肌細胞核數)×100％。應用SPSS13.0統(tǒng)計學軟件分析。⑸提取下丘腦室旁核蛋白后，采用Western blot檢測下丘腦室旁核內NF-κB蛋白水平。蛋白采用聚丙

7、烯酰胺變性凝膠方法分離，蛋白經電轉膜法轉移到硝酸纖維膜上，脫脂奶粉封閉2h，分別加入小鼠抗兔NF-κBp65(1:200)，4℃孵育過夜，辣根酶標記山羊抗兔IgG(1:2000)，37℃孵育2h，化學發(fā)光試劑顯影，顯影膠片應用UVP凝膠圖像掃描系統(tǒng)掃描吸光度，實驗組吸光度值與對照組吸光度值比值即為結果。蛋白表達水平以其與β-actin光密度比值來表示。應用SPSS13.0統(tǒng)計學軟件分析。
　　 結果：①CHF組大鼠左心室濕重/體

8、重比(LVW/BW(mg/g))，右心室濕重/體重比(RVW/BW(mg/g))和肺濕重/體重比(LW/BW(mg/g))均明顯高于SHAM組，組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。飲水中給予PTDC或EPL治療后各項心功能指標均降低，且EPL組低于PTDC組，組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，該實驗大鼠心力衰竭模型成功建立。②光鏡下凋亡陽性細胞為細胞核呈黃褐色。與SHAM組(9.68±8.40％)比較，CHF組(36.82±6.3

9、4％)心肌凋亡陽性細胞數明顯增高，組間差異有極顯著性(P<0.01)。與CHF組比較，EPL組(24.21±6.44％)可明顯降低心肌細胞凋亡，組間差異有極顯著性(P<0.01)，而PDTC組(34.24±5.92％)亦有降低作用，組間差異有顯著性(P<0.05)；EPL組與PDTC組間差異有極顯著性(P<0.01)，提示EPL抑制心肌細胞凋亡作用遠大于PDTC組，EPL在抑制心肌細胞凋亡、改善心衰癥狀方面，療效大于PDTC。③CHF組

10、(0.30±0.07)血漿醛固酮水平顯著高于SHAM組(0.14±0.07)(P<0.01)；與CHF組(0.30±0.07)比較，EPL組(0.20±0.12)可顯著降低血漿醛固酮水平(P<0.01)，PTDc組(0.28±0.12)無明顯降低醛固酮的作用(P>0.05)。EPL組與PTDC組比較，兩組間差異有極顯著性(P<0.01)，而與SHAM組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。④Westem blot結果 EPL組(0.5

11、4±0.14)、PDTC組(0.70±0.11)、CHF組(0.83±0.31)PVN內NF-κB蛋白表達較SHAM組(0.27±0.10)依次升高。各組PVN內NF-κB表達與SHAM組相比，差異均有極顯著性(P<0.01)；CHF組與EPL組比較，組間差異有極顯著性(P<0.01)，與PDTC組比較，組間差異有顯著性(P<0.05)；EPL組與PDTC組組間差異有顯著性(P<0.05)。
　　 結論：⑴CHF組大鼠血漿醛固酮

12、水平明顯高于SHAM組。⑵CHF組大鼠PVN內NF-κB表達明顯增多，其水平與心衰的嚴重程度密切相關。NF-κB可能在心力衰竭的進程中發(fā)揮了重要作用，抑制其活性有可能成為治療心衰的一個新靶點。⑶慢性心衰大鼠血漿醛固酮水平與PVN內NF-κB的表達有相關性，心衰時循環(huán)中高濃度的血漿醛固酮可激活PVN內的NF-κB，且PVN內活化的NF-κB可介導心衰過程中心肌細胞凋亡，影響心衰的發(fā)生、發(fā)展。外周途徑抑制血漿醛固酮或中樞NF-κB水平，均可