1、豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)，是新興的豬病原體，自1998年被發(fā)現以來，給全球養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經濟損失。PCV2是目前已知感染哺乳動物最小的DNA病毒，基因組為單股環(huán)狀，約1.7kb大小。最初PCV2引起的相關疾病綜合癥，被稱為斷奶仔豬多系統衰竭綜合征(PMWS)。隨著越來越多表現型的出現，如生殖障礙、腸道疾病和呼吸道癥狀等，才將PCV2引起的疾病統稱為豬圓環(huán)病毒相關疾病PCVAD。2003年以來，PCV2流行基因型從PCV2a向PCV

2、2b轉變，PCV2b基因型的患病率在全球急劇增加，且病情更為嚴重。國內已有以PCV2b為抗原的全病毒滅活苗投入市場使用，且有較好的免疫效果，但亞單位疫苗與其相比擁有安全性高、純度高、產量高等更多優(yōu)點，仍然是國內PCV2疫苗研究的熱點。
　　本研究以pEGFP-C3載體及實驗室2003年分離到的PCV2-HZ0201(PCV2b)毒株為模板，分別擴增出GFP基因和ORF2基因，利用Bac-to-Bac桿狀病毒表達系統，將目的基因插入

3、pFastBac-Dual轉移載體的多克隆位點，成功構建pFastBac-Dual-GFP-ORF2(在兩個啟動子下游分別插入GFP基因和ORF2基因)和pFastBac-Dual-2ORF2(在兩個啟動子下游都插入ORF2基因)重組轉移載體;將重組載體轉化入DH10Bac感受態(tài)細胞，在Tn7轉座子的作用下與存在于感受態(tài)細胞中的桿狀病毒基因組發(fā)生轉座;經過藍白斑篩選、PCR鑒定，獲得重組的穿梭載體rBacmid-GFP-ORF2和rBa

4、cmid-2ORF2;轉染Sf9細胞收獲重組桿狀病毒rBac-GFP-ORF2和rBac-2ORF2。以GFP熒光蛋白作為指示蛋白來判斷重組桿狀病毒感染細胞的情況，獲得了高滴度的重組桿狀病毒rBac-2ORF2;以P2代重組桿狀病毒rBac-2ORF2不同的感染復數接種Sf9細胞，在不同的時間點收樣，系統摸索出重組桿狀病毒最佳病毒擴增條件為MOI值為0.5、感染Sf9細胞后144h收樣，進一步確定Cap蛋白最佳表達條件為MOI值為2、感

5、染Sf9細胞后96h收樣。
　　以原核表達并純化的GST-dCap標準蛋白定量檢測真核表達Cap蛋白濃度可達到10μg/mL以上;利用蔗糖密度梯度離心純化Cap蛋白，2％磷鎢酸負染后在電子顯微鏡下觀察到病毒樣顆粒的形成。
　　通過PCV2膠體金試紙條半定量檢測確定Cap蛋白抗原的免疫劑量，β-丙內酯以15000滅活重組桿狀病毒，Montanide GEL01PR佐劑以5-20％乳化Cap蛋白。用制備的PCV2Cap蛋白免疫抗

6、原，并以ZJ/C株PCV2滅活疫苗作對照分組免疫BALB/C雌鼠。IFA檢測免疫后小鼠血清PCV2抗體效價、熒光定量PCR檢測攻毒后小鼠血清和脾臟組織中PCV2病毒載量來評價疫苗的免疫原性。小鼠血清抗體效價結果顯示Cap蛋白原液，5倍濃縮液免疫小鼠21d，28d均可誘導小鼠產生針對PCV2的抗體，其血清學轉陽率可達8～10/10（IFA檢測血清抗體效價≥1∶400），濃縮5倍樣品免疫小鼠后產生血清抗體效價平均水平顯著高于Cap蛋白原液，

7、免疫28d后的血清抗體效價略高于免疫后21d，差別不顯著。熒光定量PCR結果顯示，免疫組小鼠脾臟組織中PCV2病毒載量顯著低于未免疫組，說明Cap蛋白抗原可有效抵抗PCV2在小鼠脾臟組織中的復制;小鼠血清PCV2病毒載量結果顯示免疫后小鼠血清中病毒載量顯著低于未免疫組，病毒血癥發(fā)生的概率低。小鼠免疫試驗結果表明，制備的豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白免疫抗原能刺激小鼠產生針對PCV2的特異性抗體，有效抵抗病毒在小鼠體內的復制，說明該昆蟲細胞表達