1、目的：利用蛋白質組學技術和大鼠急性脊髓損傷(acute spinalcord injury,ASCI)模型,比較川芎嗪治療與生理鹽水治療后脊髓蛋白質組表達譜的差異,鑒定川芎嗪作用相關的差異蛋白質。并對差異蛋白質進行初步功能分析,從蛋白質分子水平揭示川芎嗪治療大鼠急性脊髓損傷的機制。
　　 方法：正常成年SD大鼠12只,采用改良ALLEN氏重物打擊法制作急性脊髓中度損傷模型12個。隨機分成兩組:(1)生理鹽水治療組(NS組,N組)

2、(n=6)；(2)川芎嗪治療組(TMP組,T組)(n=6)。兩組大鼠按術后動物存活的時間再各分為3天組和7天組兩個亞組,每亞組3只大鼠。TMP組大鼠傷后30分鐘開始予以川芎秦注射液經腹腔內注射200mg/kg,每天給藥一次,3天組大鼠用藥3天,7天組大鼠共用藥5天。NS組大鼠給予等量的生理鹽水經腹腔內注射,給藥次數和實驗組相同。造模后在相應的時間點處死大鼠并切取脊髓標本,每只大鼠取以損傷段為中心的長約6mm的脊髓組織。加入裂解液提取脊髓

3、蛋白質后進行蛋白質樣品濃度測定。以1000ug的上樣量進行雙向凝膠電泳,蛋白質凝膠采用考馬斯亮藍染色后用PDQuest-8.0.1圖象分析軟件進行凝膠圖像分析,尋找并切取差異表達的蛋白質斑點。用胰酶進行膠內原位酶解,獲得的小肽片段采用基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜(MALDI-TOF-MS)進行質譜分析。獲取肽質量指紋圖譜后采用MascotWizard軟件查詢SWISS-PROT和NCBInr數據庫進行檢索,鑒定差異蛋白質。基于文獻復

4、習對檢索鑒定的差異蛋白質進行初步功能分析。
　　 結果：通過固相PH梯度雙向凝膠電泳獲得了分辨率較高的雙向凝膠電泳圖譜,圖像分析后發(fā)現(xiàn)兩組圖譜間存在較明顯差異,應用基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜成功鑒定出了差異蛋白質。3天組共鑒定出了15個差異蛋白質,表達上調的有血清白蛋白前體、低分子量神經絲蛋白、波形蛋白、神經纖維酸性蛋白、α-1A微管蛋白、β-2A微管蛋白、β-2C微管蛋白、亮氨酸氨基肽酶、二氫嘧啶酶相關蛋白2,表達下調的

5、有α-互聯(lián)蛋白、60kDa熱休克蛋白、71kDa熱休克蛋白同源蛋白、70kDa,熱休克蛋白相關蛋白2、β-1熱休克蛋白、磷脂結合蛋白1；7天組共鑒定出了19個差異蛋白質,表達上調的有血清白蛋白前體、α-1A微管蛋白、β-2A微管蛋白、低分子量神經絲蛋白、中分子量神經絲蛋白、乙醛脫氫酶、鳥嘌呤核苷酸結合蛋白β1亞基、β肌動蛋白、波形蛋白、神經纖維酸性蛋白,表達下調的有H2異性核蛋白、帕金森病蛋白7同系物、囊泡相關膜蛋白B、泛素結合酶E2N