1、番茄斑萎病毒屬（Tospovirus）是布尼亞病毒科（Bunyaviridae）中唯一侵染植物的病毒屬，番茄斑萎病毒（Tomato spotted wilt virus，TSWV）是番茄斑萎病毒屬中的重要成員。其基因組為負單鏈RNA(-ssRNA)，分別為S、M和LRNA，其中MRNA編碼移動蛋白NSm。NSm能夠激活抗性基因Sw-5b介導的抗性，從而被確定為病毒的無毒因子。單顯性基因Sw-5b對番茄斑萎病毒屬病毒具有廣譜抗性，它通過識

2、別NSm來誘導過敏性壞死反應(Hypersensitive response，HR)從而防止病毒入侵。
　　Sw-5b屬于CC-NB-LRR類型的免疫受體蛋白，包括四個主要結構域:N端結構域(NTD)、CC結構域、NB-ARC結構域和C末端的LRR結構域。本課題組的前期研究表明Sw-5b的NB-LRR結構域可以特異性識別TSWV NSm蛋白而誘導HR反應。為確定Sw-5b NB-LRR結構域中與NSm識別的重要區(qū)段，本研究將不能識

3、別TSWV NSm并誘尋HR的感病番茄Heinz0176的Sw-5b NB-LRR與抗性番茄Sw-5b NB-LRR的相應結構域進行逐一替換，發(fā)現(xiàn)將Heinz0176 Sw-5b的LRR交換到抗性番茄的Sw-5b NB-LRR后不能與NSm產生HR反應，而將抗性番茄的Sw-5b的LRR交換到Heinz0176 Sw-5bNB-LRR后卻能與NSm產生HR反應，說明LRR結構域是Sw-5b NB-LRR與NSm識別的重要區(qū)段。將兩種NB-

4、LRR的氨基酸序列進行比對后發(fā)現(xiàn)二者相似性高達93.75％,其中LRR區(qū)域的相似性最低。為進一步鑒定Sw-5b NB-LRR與NSm識別的關鍵氨基酸，依次將Heinz0176 LRR中的差異氨基酸位點交換到抗性番茄Sw-5b NB-LRR的中，將這些突變體與NSm在本氏煙中共表達，發(fā)現(xiàn)其中的兩個突變體不再與NSm產生HR反應，還有兩個突變體與NSm產生的HR反應強度減弱。對這四個突變體的蛋白表達水平進行檢測后發(fā)現(xiàn)，它們的表達水平與Sw-

5、5b NB-LRR相近，排除了因蛋白不表達或表達水平很低而導致不產生HR或HR反應強度減弱的可能性。以上結果說明，這四個位點可能是Sw-5b與TSWV NSm發(fā)生識別的位點。
　　番茄和TSWV均起源于南美，Sw-5b可能是番茄在TSWV這一選擇壓的作用下不斷發(fā)生進化的結果。為從進化角度上探究Sw-5b與NSm的識別機制，本研究擴增了17種南美野生番茄Sw-5b基因的編碼序列，然后分別將它們克隆到表達載體并與NSm一起共浸潤本氏煙