1、水稻二化螟[Chilo suppressalis(Walker)]和大螟[Sesamia inferens(Walker)]是水稻上的重要害蟲(chóng)，廣泛分布于我國(guó)主要水稻種植區(qū)。二化螟的為害程度較大螟重，大螟通常在稻田周邊零星發(fā)生。長(zhǎng)期以來(lái)，水稻螟蟲(chóng)的防治主要依靠化學(xué)藥劑，其中主要包括有機(jī)磷類(lèi)殺蟲(chóng)劑毒死蜱和三唑磷、大環(huán)內(nèi)酯抗生素類(lèi)殺蟲(chóng)劑阿維菌素和甲維鹽、沙蠶毒素類(lèi)殺蟲(chóng)劑殺蟲(chóng)單及新型雙酰胺類(lèi)殺蟲(chóng)劑氯蟲(chóng)苯甲酰胺和氟苯蟲(chóng)酰胺，目前雙酰胺類(lèi)殺蟲(chóng)劑是

2、田間防治螟蟲(chóng)的主要藥劑。但是由于化學(xué)藥劑的長(zhǎng)期不合理使用，二化螟對(duì)這些藥劑均產(chǎn)生了一定的抗藥性。本研究進(jìn)行了田間二化螟種群對(duì)上述七種藥劑的抗藥性監(jiān)測(cè)，以期能夠及時(shí)了解上述藥劑的抗性發(fā)展情況。同時(shí)還進(jìn)行了二化螟對(duì)雙酰胺類(lèi)殺蟲(chóng)劑交互抗性的研究，旨在延長(zhǎng)該類(lèi)藥劑的使用壽命，使其在二化螟的防治中發(fā)揮更好的作用。為了明確大螟對(duì)氯蟲(chóng)苯甲酰胺和氟苯蟲(chóng)酰胺的活性，本研究測(cè)定了三個(gè)田間大螟種群對(duì)上述兩種藥劑的敏感性。昆蟲(chóng)魚(yú)尼丁受體是雙酰胺類(lèi)殺蟲(chóng)劑的主要靶

3、標(biāo)，鑒于目前還沒(méi)有關(guān)于大螟對(duì)雙酰胺類(lèi)殺蟲(chóng)劑作用機(jī)制的研究，因此本研究克隆了大螟魚(yú)尼丁受體基因cDNA的全長(zhǎng)序列，并對(duì)其不同組織及不同發(fā)育階段魚(yú)尼丁受體基因表達(dá)水平的差異進(jìn)行研究，以期為未來(lái)大螟對(duì)雙酰胺類(lèi)殺蟲(chóng)劑抗藥性分子機(jī)制的研究提供依據(jù)。
　　1.二化螟對(duì)七種藥劑的抗藥性監(jiān)測(cè)
　　本研究分別采用點(diǎn)滴法和稻苗浸漬法于2013-2015年測(cè)定了我國(guó)10省30地59個(gè)二化螟田間種群對(duì)氯蟲(chóng)苯甲酰胺、氟苯蟲(chóng)酰胺甲維鹽、阿維菌素、毒死蜱

4、、三唑磷及殺蟲(chóng)單七種藥劑的抗藥性。結(jié)果顯示:田間二化螟種群對(duì)這七種藥劑均存在明顯的地理差異，抗性高的種群基本都來(lái)自浙江省、江西省及湖南省，江蘇省、山東省及遼寧省的二化螟種群相對(duì)敏感，其中遼寧地區(qū)的二化螟種群對(duì)上述七種藥劑均處于敏感階段。
　　在2013-2015年，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在2015年浙江蒼南二化螟種群對(duì)氟苯蟲(chóng)酰胺已產(chǎn)生了138.4倍的高水平抗性，同時(shí)已有21個(gè)種群對(duì)該藥劑產(chǎn)生了低到中等水平抗性（5.5-85.1倍）;浙江余姚、蒼

5、南、象山及江西南城二化螟種群對(duì)氯蟲(chóng)苯甲酰胺已達(dá)到中等水平抗性（RR=10.9-77.6倍），并且有10個(gè)種群對(duì)其也產(chǎn)生了低水平抗性(5.7-8.9倍)。從連續(xù)監(jiān)測(cè)的數(shù)據(jù)可以發(fā)現(xiàn)，浙江余姚、象山及江西南城二化螟種群對(duì)雙酰胺類(lèi)殺蟲(chóng)劑一直處于較高水平的抗性，而江蘇儀征、邗江及安徽徽州3個(gè)種群一直處于相對(duì)敏感的階段。同時(shí)為了明確氯蟲(chóng)苯甲酰胺原藥和制劑的抗性水平是否存在差異，我們比較了浙江余姚和象山兩個(gè)抗性種群對(duì)97.3％氯蟲(chóng)苯甲酰胺原藥和20％

6、氯蟲(chóng)苯甲酰胺懸浮劑的抗性倍數(shù)，發(fā)現(xiàn)兩個(gè)二化螟種群對(duì)20％氯蟲(chóng)苯甲酰胺懸浮劑的抗性均高于其原藥。
　　2014-2015年，我國(guó)大部分二化螟田間種群對(duì)甲維鹽、阿維菌素及殺蟲(chóng)單仍處于敏感至敏感水平下降階段，分別占其監(jiān)測(cè)種群總數(shù)的78.2％、76.9％及88.9％,而浙江象山、金華、湖南東安及江西上高、南城種群對(duì)甲維鹽為低到中等水平抗性(5.6-22.5倍);浙江蒼南、余姚、江西上高、南城及湖南東安、攸縣對(duì)阿維菌素表現(xiàn)為低到中等水平抗性

7、（5.5-15.6倍）;只有湖南東安、安徽微州及山東臨沂三個(gè)種群對(duì)殺蟲(chóng)單產(chǎn)生了低到中等水平抗性（6.5-16.1倍）;浙江蒼南、象山及江西上高等七個(gè)種群對(duì)毒死蜱產(chǎn)生了中等水平抗性（11.2-67.6倍）;而對(duì)于三唑磷，湖南東安和浙江金華對(duì)其仍為高水平抗性（RR=216.8和209.9倍），浙江象山、蒼南及江西上高南城等七個(gè)種群對(duì)其也達(dá)到中等抗性水平。
　　2.二化螟對(duì)雙酰胺類(lèi)殺蟲(chóng)劑的交互抗性
　　為了明確二化螟對(duì)雙酰胺類(lèi)殺蟲(chóng)

8、劑溴氰蟲(chóng)酰胺、四氯蟲(chóng)酰胺及氯氟氰蟲(chóng)酰胺與氯蟲(chóng)苯甲酰胺和氟苯蟲(chóng)酰胺間是否存在交互抗性，我們以浙江余姚和象山抗性種群為試材，進(jìn)行了其對(duì)三種新雙酰胺類(lèi)殺蟲(chóng)劑的交互抗性研究，結(jié)果顯示，對(duì)氟苯蟲(chóng)酰胺和氯蟲(chóng)苯甲酰胺均產(chǎn)生了中到高水平抗性(27.6-133.6)的浙江象山、余姚二化螟種群，對(duì)溴氰蟲(chóng)酰胺、四氯蟲(chóng)酰胺和氯氟氰蟲(chóng)酰胺也產(chǎn)生了中到高水平抗性（30.3-127.0倍），則表明上述三種新雙酰胺類(lèi)殺蟲(chóng)劑與氯蟲(chóng)苯甲酰胺和氟苯蟲(chóng)酰胺之間存在交互抗性。<

9、br>　　3.水稻大螟對(duì)氯蟲(chóng)苯甲酰胺和氟苯蟲(chóng)酰胺的敏感性測(cè)定
　　本研究采用稻苗浸漬法對(duì)于2014年采自江蘇南京、通州及浙江余杭的大螟田間種群對(duì)氯蟲(chóng)苯甲酰胺和氟苯蟲(chóng)酰胺兩種雙酰胺類(lèi)殺蟲(chóng)劑的敏感性進(jìn)行了測(cè)定，結(jié)果顯示:這兩種藥劑對(duì)大螟的毒力差異顯著，大螟對(duì)氟苯蟲(chóng)酰胺比氯蟲(chóng)苯甲酰胺的敏感性高。但是不同地區(qū)大螟種群對(duì)同一種藥劑的敏感性差異不明顯。
　　4.大螟魚(yú)尼丁受體基因克隆與表達(dá)分析
　　利用RT-PCR和RACE的方法

10、，克隆得到大螟魚(yú)尼丁受體的cDNA全長(zhǎng)序列，命名為SiRyR，該序列全長(zhǎng)15428bp，開(kāi)放閱讀框15357 bp，編碼5118個(gè)氨基酸。大螟RyR氨基酸序列與甜菜夜蛾和棉鈴蟲(chóng)RyR的相似性最高，分別為97％和96％，與線蟲(chóng)、人和大鼠的相似性較低(43％-50％);此外通過(guò)構(gòu)建進(jìn)化樹(shù)，同樣發(fā)現(xiàn)大螟RyR與棉鈴蟲(chóng)和甜菜夜蛾RyR的親緣關(guān)系最近。同時(shí)對(duì)其蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)存在七種蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域，包括跨膜區(qū)結(jié)構(gòu)域、MIR結(jié)構(gòu)域、RIH結(jié)構(gòu)域、R