1、心房顫動(AF)是指心房快速的無規(guī)則的激動和收縮，它是臨床上最常見的一類心律失常。隨著年齡的增長房顫的發(fā)生呈逐年上升趨勢，在65歲以上的人群中6％的人患有此類疾病。房顫可引起血栓栓塞、心動過速造成的心肌病、心力衰竭以及心室功能異常等嚴重并發(fā)癥。它給醫(yī)療護理體系帶來了相當大的經濟負擔。房顫的離子特性在決定心律失常的發(fā)生和特點方面扮演了重要的角色。持續(xù)性房顫同心房的電重構有關。L型鈣電流的降低和內向整流性鉀電流及乙酰膽堿敏感性鉀電流的升高是

2、房顫發(fā)生與持續(xù)的重要因素。房顫的發(fā)生也呈家族聚集傾向，這就提示我們某些個體的心律失常同遺傳因素有關。一些家族性房顫的致病基因被定位在了染色體10q22和6q14-16，新的基因定位也在不斷的被發(fā)現。2003年在一個具有早發(fā)房顫特征的家系中，發(fā)現鉀離子通道KCNQ1基因的突變與房顫有關；隨后的研究又發(fā)現了兩個與房顫發(fā)生有關的基因，分別為KCNE2和KCNJ2。本實驗室最近獲得了一個具有家族性遺傳特征的房顫家系，本課題擬尋找該家族房顫的致病

3、基因，并對其致病的分子機制進行探討。 第一部分：建立PCR-SSCP方法目的：建立聚合酶鏈-單鏈構象多態(tài)性分析方法，為篩查突變基因做準備。 方法：(1)預實驗樣本的選擇：野生型Kir2.3質粒和突變型Kir2.3(I2123L)質粒。(2)凝膠濃度：PCR結果的鑒定采用2％的瓊脂糖凝膠，SSCP分析采用12％的非變性聚丙烯酰胺凝膠。(3)顯色方法：瓊脂糖凝膠EB顯色，非變性聚丙烯酰胺凝膠DNA銀染顯色。(4)PCR產物變

4、性比較了三種方法：即堿變性、SDS變性、加入甲酰胺變性上樣液直接變性。(5)實驗分組：根據凝膠中丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺的比例分為A(49∶1)、B(29∶1)兩組，每組再根據甘油的比例(0％、1％、5％)分三個小組，即A1、A2、A3和B1、B2、B3。(6)電泳條件：每塊凝膠選擇兩種電泳條件電泳，分別為30mA恒流快速電泳和100V恒流過夜電泳。 小結：由于SSCP分析的高度敏感性和一些不明白的原因，其結果在分析時有一些難度

5、。在本試驗中只將它做為一種粗篩的手段，最后的結論以測序結果為準。 第二部分：篩查家族性房顫致病基因目的：尋找該家族性房顫的致病基因，并對其致病的分子機制進行探討。 方法：(1)收集家系資料；(2)對家系成員進行臨床診斷；(3)采集血樣提取基因組DNA；(4)構建家系系譜；(5)設計特異性引物，PCR擴增目的片段；(6)采用SSCP方法對擴增產物進行粗篩；(7)若發(fā)現可疑基因則純化PCR產物進行測序；(8)將測序結果經NC

6、BI(美國國家生物技術信息中心)GenebankBLAST軟件進行對比以發(fā)現可疑突變點；(9)將該點與SNP數據庫中收錄的多態(tài)性位點進行比對，以期獲得通道突變信息。 小結：利用分子生物學，并結合遺傳學、生物信息學的方法我們在KCNQ1基因上發(fā)現了一個新的與我們掌握的家族性房顫有關的單點突變，即KCNQ1(P448R)。進一步的通道功能研究將確證該突變是否為導致房顫發(fā)生的分子基礎。 結論: 1.SSCP是一種簡單快