1、該研究設(shè)計(jì)以小鼠pⅣ型CⅡTA mRNA為模板的反義片段,片段全長(zhǎng)為431bp,覆蓋了起始密碼子上游22個(gè)堿基及閱讀框5'端409個(gè)堿基,也包含了第一外顯子和第二外顯子間的剪接位點(diǎn);用常規(guī)分子生物學(xué)方法構(gòu)建了反義片段的腺病毒表達(dá)載體(pAdEasy-1系統(tǒng));腺病毒載體經(jīng)HEK293細(xì)胞包裝產(chǎn)生含反義片段的重組腺病毒Ad-CⅡTA,用氯化銫密度梯度離心法獲得純化的高滴度腺病毒;采用多種方法對(duì)重組腺病毒進(jìn)行了定量檢測(cè)與活性評(píng)價(jià);并將Ad-

2、CⅡTA分別感染Hela細(xì)胞與P388D1細(xì)胞,觀察其對(duì)誘導(dǎo)型與組成型MHC-Ⅱ類分子表達(dá)的抑制;用純化的豬心肌肌凝蛋白免疫Balb/c小鼠,誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性心肌炎動(dòng)物模型的產(chǎn)生,并分別于免疫后0~2天與14~16天經(jīng)尾靜脈注射重組腺病毒,觀察Ad-CⅡTA對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性心肌炎的預(yù)防與治療效果.第一部分,攜帶小鼠MHC-Ⅱ類分子反式作用因子基因反義片段的重組腺病毒載體的構(gòu)建;第二部分,重組腺病毒的純化與定量檢測(cè);第三部分,腺病毒

3、介導(dǎo)反義CⅡTA基因轉(zhuǎn)移抑制MHC-Ⅱ類分子表達(dá)的體外研究;第四部分,重組腺病毒Ad-CⅡTA介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)移對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性心肌炎的防治.在該研究中,我們使用的Ad-CⅡTA在不同病理時(shí)期對(duì)EAM進(jìn)行治療均取得了較好的效果,這為臨床治療自身免疫性心肌炎提供了有意義的啟示,因?yàn)镋AM與人類心肌炎的病理過(guò)程十分相似.但是我們也注意到,人類心肌炎大多由嗜心性病毒引起,目前認(rèn)為病毒并非是造成心肌炎病理?yè)p傷的直接原因,一過(guò)性的病毒感染導(dǎo)致受染心肌