1、背景：傳統(tǒng)的急性腎小管壞死修復理論認為，腎小管的重建依賴于壞死區(qū)周圍存活的腎小管上皮細胞，這些細胞經(jīng)過去分化、增殖和分化成熟等過程修復壞死的腎小管，重建其組織結構和功能。近年來隨著對干細胞研究的深入，發(fā)現(xiàn)成體組織內(nèi)存在著一些被稱為成體干細胞的多能干細胞，這些干細胞具有多向分化的能力，甚至可以跨越譜系界限分化成其它組織細胞，在損傷修復中具有重要意義。骨髓中含有豐富的成體干細胞，最近有數(shù)項研究認為骨髓來源的干細胞可以分化成腎小管上皮細胞，參

2、與急性腎小管壞死的修復，但目前對這一結論尚有爭議。 目的：本研究擬通過建立缺血再灌注腎損傷動物模型，觀察骨髓來源的干細胞能否分化成腎小管上皮細胞，深化對造血干細胞可塑性的認識，探討造血干細胞在急性腎小管壞死修復中的作用，豐富急性腎小管壞死修復的理論。 方法：綠色熒光蛋白標記的C57BL/6轉基因小鼠提供造血干細胞，同種無熒光標記的C57BL/6小鼠分為四組：(1)正常對照組：觀察正常小鼠血液學指標和腎組織結構；(2)缺血

3、再灌注組：手術夾閉小鼠單側腎蒂30min再開放建立單側腎臟缺血再灌注損傷模型，建模后第3天、7天、14天、28天分別取腎臟標本，觀察雙側腎臟病理變化；(3)造血干細胞移植組：骨髓造血干細胞移植，分別在移植后第56天、84天處死，觀察造血干細胞在無損傷的小鼠腎臟中的分化；(4)造血干細胞移植+缺血再灌注組：造血干細胞移植后第56天建立單側缺血再灌注損傷模型，對照觀察供體造血干細胞在雙側腎臟的分化情況。造血干細胞移植受體小鼠的骨髓重建經(jīng)血液

4、常規(guī)檢測確認。采用熒光組織化學、免疫組織化學等方法觀察綠色熒光在造血干細胞移植小鼠腎臟的分布及數(shù)量。 結果：單側腎臟缺血再灌注可引起小鼠急性腎小管壞死改變，近端小管最易受累，表現(xiàn)為受累的上皮細胞刷狀緣脫落，細胞扁平，管腔擴張；部分細胞從基底膜脫離，可見裸露的基底膜；部分小管上皮細胞空泡變性及腫脹破裂，胞核消失；管腔內(nèi)可見脫落的上皮細胞，數(shù)處管腔內(nèi)充滿細胞碎屑，可見斑片狀的壞死區(qū)；間質水腫，散在炎性細胞浸潤。腎臟缺血再灌注損傷時對

5、側腎臟損傷程度相對較輕，修復時間也相應縮短(14天)。腎臟組織學評分結果顯示，缺血再灌注損傷手術側病變重于對側，修復時間較長。生化檢驗結果發(fā)現(xiàn)，單側腎臟缺血再灌注組尿素氮、肌酐水平無顯著改變(P>0.05)；小鼠腎小管的修復過程從第3天開始，28天可觀察到腎小管修復基本完成，造血干細胞移植后腎小管壞死模型小鼠表現(xiàn)出同樣的演變過程。造血細胞移植后56天、84天的小鼠腎小管中有少量綠色熒光蛋白陽性細胞存在，激光共聚焦顯微鏡進一步證實這些細胞

6、位于腎小管，并表達腎小管上皮細胞特異性功能蛋白Megalin，表明供體造血干細胞已分化成有功能的腎小管上皮細胞，提示，在無腎小管損傷的生理情況下，造血干細胞可以參與腎小管上皮細胞的更新。 缺血再灌注模型中，手術側腎組織中供體造血干細胞來源的腎小管上皮細胞數(shù)量明顯多于對側，提示造血干細胞定向分化的水平與腎小管損傷程度有關。 結論：缺血再灌注損傷可誘導小鼠急性腎小管壞死：在生理情況下，造血干細胞可以分化成腎小管上皮細胞，參與