1、目前有關PTEN和CaN的研究多局限于心肌細胞肥大中，在心肌纖維化上的研究很少；在他汀類藥物抗心肌纖維化中PTEN和CaN是否參與未見相關報道。故本研究以體外培養(yǎng)的新生SD大鼠心肌成纖維細胞為研究對象，以醛固酮誘導其心肌成纖維細胞增殖和膠原合成，并加入阿托伐他汀(atorvastatin，Ato)干預，觀察在阿托伐他汀逆轉心肌成纖維細胞增殖的過程中PTEN mRNA和蛋白、CaN mRNA和蛋白的表達變化，并進一步觀察加入FPP、GGP

2、P分別逆轉阿托伐他汀對Ras和Rho蛋白的作用后上述指標的表達變化，以探討PTEN和CaN是否參與了他汀類藥物抗心肌纖維化的作用，并明確PTEN和CaN在甲羥戊酸途徑中與Rho及Ras蛋白的關系，從而深入了解他汀類藥物抗心肌纖維化的信號轉導機制。 第一部分醛固酮對心肌成纖維細胞鈣調神經(jīng)磷酸酶表達的影響 方法：用胰酶消化法分離并培養(yǎng)新生SD大鼠的心肌成纖維細胞，以醛固酮誘導其增殖和膠原合成，并加入螺內(nèi)酯(spironola

3、ctone，Spi)干預，采用MTT檢測心肌成纖維細胞的增殖，羥脯氨酸檢測其膠原合成，半定量RT-PCR測定心肌成纖維細胞CaN mRNA的表達，Western blot測定其CaN蛋白的表達變化。 結果： 1.醛固酮和螺內(nèi)酯對心肌成纖維細胞增殖的影響：與對照組比較，10-7mol/L、10-8mol/L、10-9mol/L Ald組的平均吸光度值均顯著升高(P<0.05)，但三組之間沒有差異性；10-7mol/L Al

4、d+10-8mol/L、10-9mol/L Spi組的平均吸光度值均明顯低于10-7mol/L Ald組(P<0.05)，而與對照組比較沒有差異性，兩組之間比較也沒有差異性。 2.醛固酮和螺內(nèi)酯對心肌成纖維細胞膠原合成的影響：與對照組比較，10-7mol/L、10-8mol/L、10-9mol/L Ald組的羥脯氨酸含量均顯著升高(P<0.05)，但三組之間沒有差異性；10-7mol/L Ald+10-8mol/L、10-9mo

5、l/L Spi組的羥脯氨酸含量均明顯低于10-7mol/L Ald組(P<0.05)，而與對照組比較沒有差異性，兩組之間比較也沒有差異性。 3.醛固酮對心肌成纖維細胞CaN mRNA表達的影響：與對照組相比，10-7mol/L、10-8mol/L、10-9mol/L Ald組的CaN mRNA水平明顯升高(P＜0.05)，并呈濃度依賴性，10-7mol/L Ald組的CaN mRNA水平明顯高于10-8mol/L和10-9mol

6、/L Ald組(P＜0.05)。 4 螺內(nèi)酯對心肌成纖維細胞CaN mRNA表達的影響：10-7mol/L Ald+10-8mol/L、10-9mol/L Spi組的CaN mRNA水平明顯低于10-7mol/L Ald組(P＜0.05)，而與對照組比較沒有差異性，兩組之間比較也沒有差異性。 5 醛固酮對心肌成纖維細胞CaN蛋白表達的影響：10-7mol/L、10-8mol/L、10-9mol/L Ald組的CaN蛋白水

7、平明顯高于對照組(P＜0.05)，并呈濃度依賴性，10-7mol/L Ald組的CaN蛋白水平明顯高于10-8mol/L和10-9mol/L Ald組(P＜0.05)。 6 螺內(nèi)酯對心肌成纖維細胞CaN蛋白表達的影響：10-7mol/L Ald+10-8mol/L、10-9mol/L Spi組的CaN蛋白水平明顯低于10-7mol/L Ald組(P＜0.05)，而與對照組比較沒有差異性，兩組之間比較也沒有差異性。 結論：

8、外源性醛固酮可誘導心肌成纖維細胞增殖和膠原合成，發(fā)揮其致心肌纖維化作用，此作用與其通過鹽皮質激素受體(MR)介導的基因組通路升高CaN mRNA、蛋白水平的表達有關。 第二部分醛固酮對心肌成纖維細胞PTEN表達的影響 方法：以體外培養(yǎng)的新生SD大鼠心肌成纖維細胞為研究對象，加入醛固酮和螺內(nèi)酯干預后，采用MTT檢測心肌成纖維細胞的增殖，羥脯氨酸檢測其膠原合成，半定量RT-PCR測定心肌成纖維細胞PTEN mRNA的表達，W

9、estern blot測定其PTEN蛋白的表達。 結果： 1.醛固酮和螺內(nèi)酯對心肌成纖維細胞增殖的影響：與對照組比較，10-7mol/L、10-8mol/L、10-9mol/L Ald組的平均吸光度值均顯著升高(P＜0.05)，但三組之間沒有差異性；10-7mol/L Ald+10-8mol/L、10-9mol/L Spi組的平均吸光度值均明顯低于10-7mol/L Ald組(P＜0.05)，而與對照組比較沒有差異性，兩

10、組之間比較也沒有差異性。 2.醛固酮和螺內(nèi)酯對心肌成纖維細胞膠原合成的影響：與對照組比較，10-7mol/L、10-8mol/L、10-9mol/L Ald組的羥脯氨酸含量均顯著升高(P＜0.05)，但三組之間沒有差異性：10-7mol/L Ald+10-8mol/L、10-9mol/L Spi組的羥脯氨酸含量均明顯低于10-7mol/L Ald組(P<0.05)，而與對照組比較沒有差異性，兩組之間比較也沒有差異性。 3

11、.醛固酮對心肌成纖維細胞PTEN mRNA表達的影響：與對照組相比，10-7mol/L、10-8mol/L、10-9mol/L Ald組的PTEN mRNA水平明顯降低(P<0.05)，并呈濃度依賴性，10-7mol/L Ald組的PTEN mRNA水平明顯低于10-8mol/L和10-9mol/L Ald組(P<0.05)。 4 螺內(nèi)酯對心肌成纖維細胞PTEN mRNA表達的影響：10-7mol/L Ald+10-8mol/L

12、、10-9mol/L Spi組的PTEN mRNA水平均明顯高于10-7mol/L Ald組(P<0.05)，但與對照組比較沒有差異性，兩組之間比較也沒有差異性。 5 醛固酮對心肌成纖維細胞PTEN蛋白表達的影響：10-7mol/L、10-8mol/L、10-9mol/L Ald組的PTEN蛋白水平明顯低于對照組(P<0.05)，并呈濃度依賴性，10-7mol/L Ald組的PTEN蛋白水平明顯低于10-8mol/L和10-9m

13、ol/L Ald組(P<0.05)。 6 螺內(nèi)酯對心肌成纖維細胞PTEN蛋白表達的影響：10-7mol/L Ald+10-8mol/L、10-9mol/L Spi組的PTEN蛋白水平均明顯高于10-7mol/L Ald組(P<0.05)，但與對照組比較沒有差異性，兩組之間比較也沒有差異性。 結論：醛固酮可通過MR介導的基因組通路降低PTEN mRNA、蛋白水平的表達發(fā)揮其致心肌纖維化作用。 第三部分阿托伐他汀對醛

14、固酮誘導的心肌成纖維細胞鈣調神經(jīng)磷酸酶表達的影響 方法：用醛固酮誘導新生SD大鼠的心肌成纖維細胞增殖和膠原合成，并加入阿托伐他汀、FPP和GGPP干預，采用MTT檢測心肌成纖維細胞的增殖，羥脯氨酸檢測其膠原合成，半定量RT-PCR測定心肌成纖維細胞CaN mRNA的表達，Western blot測定其CaN蛋白的表達變化。 第四部分阿托伐他汀對醛固酮誘導的心肌成纖維細胞PTEN表達的影響 方法：用醛固酮誘導新生S

15、D大鼠的心肌成纖維細胞增殖，并加入阿托伐他汀、FPP和GGPP干預，采用MTT檢測心肌成纖維細胞的增殖，羥脯氨酸檢測其膠原合成，半定量RT-PCR測定心肌成纖維細胞PTENmRNA的表達，Western blot測定其PTEN蛋白的表達變化。 第五部分在醛固酮誘導和阿托伐他汀干預的心肌成纖維細胞中CaN和PTEN表達的相關性分析 方法：用醛固酮誘導新生SD大鼠的心肌成纖維細胞增殖，并加入阿托伐他汀干預，半定量RT-PCR

16、測定心肌成纖維細胞CaN和PTEN mRNA的表達，Western blot測定其CaN和PTEN蛋白的表達，運用Spearman等級相關分析處理CaN和PTEN表達的相關性分析，檢驗水準取α=0.05。 總結 1.外源性醛固酮可誘導心肌成纖維細胞增殖和膠原合成，發(fā)揮其致心肌纖維化作用，與其通過MR介導的基因組通路升高CaN表達有關。 2.醛固酮可通過MR介導的基因組通路降低PTEN表達發(fā)揮其致心肌纖維化作用。